目的小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫細(xì)胞,其功能障礙與AD的發(fā)病密切相關(guān)。本研究以雄性APPswe/PS1dE9(APP/PS1)小鼠為實驗對象,探討3個月的跑臺運動干預(yù)對該模型小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和海馬Aβ累積的影響。本研究從小膠質(zhì)細(xì)胞清除、吞噬和降解功能分析運動減少海馬Aβ累積的細(xì)胞學(xué)機制。方法將48只3月齡雄性APP/PS1小鼠隨機分為APP/PS1安靜組(APP/PS1-SED,n=24)和APP/PS1運動組(APP/PS1-EX,n=24),將42只3月齡雄性C57BL/6野生小鼠隨機分為野生安靜組(WT-SED,n=21)和野生運動組(WT-EX,n=21)。APP/PS1-EX組小鼠和WT-EX組小鼠進(jìn)行3個月的有氧跑臺運動,每天45min,每周5天。運動干預(yù)結(jié)束后,采用Morris水迷宮實驗檢測各組小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。行為學(xué)實驗結(jié)束24小時后,每組取6只小鼠深度麻醉后經(jīng)心灌注預(yù)冷的PBS沖出血液,隨后取右半腦置于4%多聚甲醛中固定制成石蠟切片,左側(cè)海馬組織用于Elisa實驗;每組另取6只小鼠深度麻醉后取左右海馬組織,流式分選小膠質(zhì)細(xì)胞后,用于Elisa和Wester...

【文章頁數(shù)】：140 頁

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
2 文獻(xiàn)綜述
    2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞概述
        2.1.1 小膠質(zhì)細(xì)胞的來源
        2.1.2 小膠質(zhì)細(xì)胞的免疫學(xué)標(biāo)記
        2.1.3 小膠質(zhì)細(xì)胞的分型
    2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞清除Aβ
    2.3 小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬清除Aβ的機制
        2.3.1 小膠質(zhì)細(xì)胞表面受體介導(dǎo)Aβ的吞噬
        2.3.2 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體對Aβ的降解
    2.4 AD腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的活動異常
        2.4.1 小膠質(zhì)細(xì)胞增生和活化增多
        2.4.2 小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)改變
        2.4.3 小膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙
    2.5 運動與AD
        2.5.1 運動改善AD認(rèn)知功能
        2.5.2 運動減輕Aβ累積
        2.5.3 運動改善AD腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的活動異常
    2.6 小結(jié)
3 實驗一 跑臺運動對APP/PS1 小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和Aβ累積的影響
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗動物及分組
        3.2.2 運動方案
        3.2.3 Morris水迷宮實驗
        3.2.4 取材
        3.2.5 Elisa檢測小鼠海馬Aβ40和Aβ42 水平
        3.2.6 Methoxy-X04 染色測定纖維樣Aβ沉積
        3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.3 研究結(jié)果
        3.3.1 Morris水迷宮實驗結(jié)果
        3.3.2 小鼠海馬可溶性Aβ40、Aβ42 水平
        3.3.4 小鼠海馬纖維樣Aβ沉積水平
    3.4 分析討論
        3.4.1 跑臺運動對APP/PS1 小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的影響
        3.4.2 跑臺運動對APP/PS1 小鼠海馬Aβ累積的影響
    3.5 結(jié)論
4 實驗二 跑臺運動對APP/PS1 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞清除Aβ能力的影響
    4.1 前言
    4.2 實驗材料與方法
        4.2.1 實驗動物、分組、運動方案和取材
        4.2.2 原代小膠質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
        4.2.3 纖維樣Aβ的制備
        4.2.4 體外Aβ清除實驗
        4.2.5 在體Aβ吞噬實驗
        4.2.6 體外Aβ吞噬實驗
        4.2.7 體外Aβ降解實驗
        4.2.8 小膠質(zhì)細(xì)胞分選
        4.2.9 Elisa檢測小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Aβ水平
        4.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.3 研究結(jié)果
        4.3.1 體外Aβ清除實驗結(jié)果
        4.3.2 在體Aβ吞噬實驗結(jié)果
        4.3.3 體外Aβ吞噬實驗結(jié)果
        4.3.4 體外Aβ降解實驗結(jié)果
        4.3.5 小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可溶性Aβ水平
    4.4 分析討論
        4.4.1 跑臺運動對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞清除纖維樣Aβ能力的影響
        4.4.2 跑臺運動對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬和降解纖維樣Aβ能力的影響
        4.4.3 跑臺運動對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Aβ水平的影響
    4.5 結(jié)論
5 實驗三 跑臺運動對APP/PS1 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體功能的影響
    5.1 前言
    5.2 實驗材料與方法
        5.2.1 實驗動物、分組和運動方案
        5.2.2 原代小膠質(zhì)細(xì)胞分離和小膠質(zhì)細(xì)胞分選
        5.2.3 TFEB免疫熒光
        5.2.4 Western blot
        5.2.5 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體pH的測定
        5.2.6 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體酶活性檢測
        5.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    5.3 研究結(jié)果
        5.3.1 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體TFEB的表達(dá)和核轉(zhuǎn)位
        5.3.2 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體膜蛋白LAMP1和LAMP2 的水平
        5.3.3 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體pH
        5.3.4 小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體酶CTSB和 CTSD的表達(dá)和活性
    5.4 分析討論
        5.4.1 跑臺運動對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞TFEB表達(dá)和核轉(zhuǎn)位的影響
        5.4.2 跑臺運動對小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體功能的影響
    5.5 結(jié)論
6 研究總結(jié)
    6.1 總體分析
    6.2 研究總體結(jié)論
    6.3 研究的創(chuàng)新與不足
        6.3.1 創(chuàng)新
        6.3.2 不足
參考文獻(xiàn)
附錄
動物實驗倫理審查表
致謝
作者簡歷及在學(xué)期間的學(xué)術(shù)成果



本文編號：3862598