成熟‘黑柿’的果皮顏色烏黑。目前關(guān)于‘黑柿’果皮色素的形成機理并不清楚。本文首先研究柿果皮常見色素,接著分離鑒定‘黑柿’果皮黑色色素,研究PPO基因在‘黑柿’果皮黑色色素合成中的功能,最后通過測定‘黑柿’果皮代謝物并結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測序研究抑制‘黑柿’果皮黑色色素合成的影響因素。主要研究結(jié)果如下:1.柿果皮色素分析。類胡蘿卜素和酚類是柿果皮中的常見色素。液相色譜檢測結(jié)果表明酚類化合物和類胡蘿卜素在柿果實成熟期間大量積累。果實發(fā)育期末‘黑柿’果皮中的類胡蘿卜素以β-胡蘿卜素為主,‘火罐’以番茄紅素為主,‘金萍’果皮中的β-胡蘿卜素和番茄紅素含量差異較小。三個柿品種中的酚類化合物以原花青素B1、蘆丁、金絲桃苷和表兒茶素為主。柿果皮中未發(fā)現(xiàn)花青苷類物質(zhì),‘黑柿’果皮所特有的黑色色素物質(zhì)是一種未知色素。2.‘黑柿’果皮黑色色素物質(zhì)是一種黑色素。該色素主要位于上表皮和皮下組織細胞的細胞壁。提取并純化‘黑柿’果皮色素物質(zhì)。提取的色素物質(zhì)具有層狀結(jié)構(gòu)�？扇苄栽囼灪妥贤�-可見分光光度(UV-vis)分析結(jié)果表明,該色素是一類黑色素。傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)分析結(jié)果表明,該黑色素具有典型的吲哚結(jié)構(gòu)、脂...

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 植物中天然存在的色素物質(zhì)
    1.2 柿果皮中常見的色素物質(zhì)
    1.3 植物黑色素的性質(zhì)與合成研究進展
    1.4 多酚氧化酶
        1.4.1 多酚氧化酶與果蔬褐變研究進展
        1.4.2 PPO基因研究進展
    1.5 逆境脅迫
        1.5.1 高溫強光脅迫與植物生長發(fā)育研究進展
        1.5.2 植物抵御高溫脅迫的機制研究進展
        1.5.3 植物抵御強光脅迫的機制研究進展
    1.6 研究的目的意義和內(nèi)容
        1.6.1 目的和意義
        1.6.2 主要研究內(nèi)容
第二章 柿果皮色素物質(zhì)含量變化的研究
    2.1 材料
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗用試劑
    2.2 方法
        2.2.1 柿果實生長發(fā)育參數(shù)和果皮顏色的測定
        2.2.2 葉綠素的提取和定量
        2.2.3 類胡蘿卜素的提取與定量
        2.2.4 酚類化合物的提取與定量
        2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 柿果實成熟過程中的形態(tài)及發(fā)育相關(guān)參數(shù)變化
        2.3.2 柿果實發(fā)育和成熟期間果皮中類胡蘿卜素含量變化
        2.3.3 柿果實發(fā)育和成熟過程中酚類含量變化
    2.4 討論
        2.4.1 柿果實發(fā)育成熟過程中類胡蘿卜素的積累
        2.4.2 ‘黑柿’果皮呈黑色與花青素?zé)o關(guān)
    小結(jié)
第三章 ‘黑柿’果皮黑色素鑒定及其性質(zhì)的初步研究
    3.1 材料
        3.1.1 試驗材料與試劑
    3.2 方法
        3.2.1 ‘黑柿’果皮的顯微觀察
        3.2.2 ‘黑柿’果皮黑色素的分離
        3.2.3 ‘黑柿’果皮黑色素的超微結(jié)構(gòu)觀察
        3.2.4 ‘黑柿’果皮黑色素的可溶性、析出與氧化反應(yīng)
        3.2.5 ‘黑柿’果皮黑色素的紫外-可見吸收光譜分析
        3.2.6 ‘黑柿’果皮黑色素的FT-IR分析
        3.2.7 ‘黑柿’果皮黑色素的抗氧化能力分析
        3.2.8 ‘黑柿’果皮黑色素的抑菌能力分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 ‘黑柿’果皮的顯微觀察
        3.3.2 ‘黑柿’果皮提取物的掃描電鏡觀察
        3.3.3 ‘黑柿’果皮提取物的溶解性、氧化和析出反應(yīng)
        3.3.4 ‘黑柿’果皮黑色素的紫外-可見光譜分析
        3.3.5 ‘黑柿’果皮黑色素的傅里葉變換紅外光譜分析
        3.3.6 ‘黑柿’果皮黑色素的抗氧化能力
        3.3.7 ‘黑柿’果皮黑色素對灰葡萄孢生長的體外抑制作用
    小結(jié)
第四章 PPO基因促進‘黑柿’果皮黑色素合成的功能研究
    4.1 材料
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試劑與培養(yǎng)基配制
    4.2 方法
        4.2.1 柿DNA提取
        4.2.2 柿RNA提取
        4.2.3 柿cDNA合成
        4.2.4 柿多酚氧化酶基因片段的克隆
        4.2.5 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α
        4.2.6 重組載體的鑒定與測序
        4.2.7 GV3101感受態(tài)制備和轉(zhuǎn)化
        4.2.8 轉(zhuǎn)化GV3101感受態(tài)細胞
        4.2.9 DH5a感受態(tài)的制備
        4.2.10 BL21感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化
        4.2.11 柿PPO基因生物信息學(xué)分析
        4.2.12 植物過表達載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
        4.2.13 病毒誘導(dǎo)的基因沉默載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
        4.2.14 原核表達載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
        4.2.15 柿多酚氧化酶基因啟動子的克隆
        4.2.16 啟動子的生物信息學(xué)分析
        4.2.17 DkPPO的定量表達分析
        4.2.18 DkPPO在大腸桿菌中的異源表達
        4.2.19 DkPPO的同源過表達分析
        4.2.20 病毒誘導(dǎo)的基因沉默
        4.2.21 PPO酶活性分析
        4.2.22 紫外-可見分光光譜分析
        4.2.23 傅里葉變換紅外光譜分析
        4.2.24 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 PPO活性與基因表達分析
        4.3.2 DkPPO的克隆和序列分析
        4.3.3 ‘黑柿’PPO的功能分析
        4.3.4 ‘黑柿’多酚氧化酶基因啟動子的生物信息學(xué)分析
    小結(jié)
第五章 強光脅迫抑制‘黑柿’果皮黑色素合成的機制研究
    5.1 材料
        5.1.1 植物材料
    5.2 方法
        5.2.1 過氧化物含量分析
        5.2.2 葉綠素含量提取與分析
        5.2.3 葉綠素光合參數(shù)分析
        5.2.4 葉綠體超微結(jié)構(gòu)觀察
        5.2.5 酚類化合物的提取與分析
        5.2.6 類胡蘿卜素的提取與分析
        5.2.7 有機酸含量分析
        5.2.8 糖組分含量分析
        5.2.9 多酚氧化酶活性分析
        5.2.10 柿轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 強光脅迫抑制‘黑柿’果皮黑色素合成
        5.3.2 強光脅迫對果皮中酚類化合物含量的影響
        5.3.3 強光脅迫對柿果皮中類胡蘿卜素含量的影響
        5.3.4 強光脅迫對柿果皮中有機酸和糖含量的影響
        5.3.5 強光脅迫對柿果皮中多酚氧化酶活性與基因表達的影響
        5.3.6 強光脅迫和正常柿果皮的轉(zhuǎn)錄組學(xué)結(jié)果分析
    5.4 討論
    小結(jié)
第六章 結(jié)論與創(chuàng)新
    6.1 結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
附錄
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3873666