植物進(jìn)化出了細(xì)胞表面的免疫受體蛋白(Pattern recognition receptor,PRR)和胞內(nèi)免疫受體蛋白(Nucleotide-binding leucine-rich repeat receptor,NLR)來識別病原效應(yīng)因子并進(jìn)而啟動先天免疫系統(tǒng)來抵御病原物的侵染。NLR類受體蛋白作為最大的一類抗性蛋白,其結(jié)構(gòu)主要包括N端結(jié)構(gòu)域、核酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Nucleotide-binding,NB)和富亮氨酸重復(fù)的結(jié)構(gòu)域(Leucine-rich repeat,LRR),根據(jù)其N末端結(jié)構(gòu)域不同大致分為N末端含有Toll-白細(xì)胞介素1受體(Toll/IL-1 receptor,TIR)結(jié)構(gòu)域的TIR-NBS-LRR和N末端含有卷曲螺旋(Coiled-coil,CC)結(jié)構(gòu)域的CC-NBS-LRR兩大類型。NLR免疫受體蛋白識別病原物效應(yīng)因子并迅速激活下游信號傳導(dǎo)途徑,引發(fā)寄主產(chǎn)生強烈的過敏性程序化壞死反應(yīng)(Hypersensitive response-programmed cell death,HR-PCD)。雖然目前植物NLR蛋白激活和信號傳導(dǎo)的分子細(xì)節(jié)尚未完全了解,但是針對...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 植物天然免疫概述
        1.1 植物天然免疫系統(tǒng)
            1.1.1 PAMP觸發(fā)的基礎(chǔ)免疫反應(yīng)(PTI)
            1.1.2 效應(yīng)子觸發(fā)的免疫反應(yīng)(ETI)
        1.2 植物NLR蛋白對效應(yīng)因子的識別與信號傳遞
            1.2.1 植物NLR對病原物效應(yīng)因子的識別
            1.2.2 植物NLR蛋白的下游信號傳導(dǎo)
        1.3 核苷酸結(jié)合和NLR寡聚化
            1.3.1 NLR蛋白的核苷酸結(jié)合
            1.3.2 NLR蛋白寡聚化
        1.4 輔助NLRs
        1.5 植物NLR亞細(xì)胞定位的多樣化
        1.6 NLR蛋白介導(dǎo)的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和防御激活
            1.6.1 NLR蛋白介導(dǎo)的下游免疫信號
            1.6.2 與效應(yīng)因子觸發(fā)的免疫反應(yīng)(ETI)相關(guān)的細(xì)胞變化
    2 長線形病毒科(Closteroviridae)概述
        2.1 長線形病毒科病毒的生物學(xué)特性
        2.2 長線形病毒家族的基因重組
            2.2.1 長線形病毒屬病毒的基因重組
            2.2.2 毛形病毒屬病毒的基因重組
        2.3 萵苣褪綠病毒(Lettuce chlorosis virus)
    3 本研究的目的意義
第二章 免疫受體蛋白Sw-5b誘導(dǎo)過敏性壞死反應(yīng)的信號傳導(dǎo)域及其作用機制研究
    1 實驗材料和方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 植物材料
            1.1.2 毒源
            1.1.3 番茄抗病基因Sw-5b
            1.1.4 引物
            1.1.5 菌株
        1.2 實驗方法
            1.2.1 培養(yǎng)基配制
            1.2.2 感受態(tài)制備
            1.2.3 載體構(gòu)建
            1.2.4 質(zhì)粒電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌并浸潤寄主植物
            1.2.5 Western Blot分析
            1.2.6 免疫共沉淀(Co-IP)
            1.2.7 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)
            1.2.8 觀察植物細(xì)胞熒光表達(dá)
            1.2.9 氨基酸序列比對和同源建模
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Sw-5b NB結(jié)構(gòu)域單獨足以誘導(dǎo)過敏性壞死反應(yīng)
        2.2 NB介導(dǎo)的過敏性壞死反應(yīng)依賴于SGT1
        2.3 NB結(jié)構(gòu)域的N端和C端對誘導(dǎo)過敏性壞死反應(yīng)都具有重要作用
        2.4 P-loop基序?qū)B觸發(fā)的過敏性壞死反應(yīng)的作用鑒定
        2.5 NB結(jié)構(gòu)域的二聚體化對于其誘導(dǎo)細(xì)胞死亡是必需的
        2.6 NB結(jié)構(gòu)域誘導(dǎo)的過敏性壞死反應(yīng)需要NB的細(xì)胞質(zhì)分布
        2.7 輔助蛋白NRCs參與NB介導(dǎo)的過敏性壞死反應(yīng)過程
    3 討論
第三章 中國萵苣褪綠病毒南京分離物的全長基因組測定和序列分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 植物材料
            1.1.2 毒源
        1.2 實驗方法
            1.2.1 Trizol法提取植物RNA
            1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)
            1.2.3 測序
            1.2.4 RNA 3'Race
            1.2.5 RNA 5'Race
            1.2.6 序列組裝、ORF預(yù)測、氨基酸序列比對和進(jìn)化樹分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 LCV-NJ基因組RNA1的全長序列測定與分析
        2.2 LCV-NJ基因組RNA2的全長序列測定與分析
        2.3 LCV-NJ的5'UTR和3'UTR分析
        2.4 LCV-NJ的系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3 討論
第四章 全文總結(jié)
    1.1 全文總結(jié)
        1.1.1 免疫受體蛋白Sw-5b誘導(dǎo)過敏性壞死反應(yīng)的信號傳導(dǎo)域及其作用機制研究
        1.1.2 中國萵苣褪綠病毒南京分離物的全長基因組測定和序列分析
    1.2 本研究的創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
附錄A 縮略詞表
附錄B 載體構(gòu)建及引物信息
附錄C 常用抗生素及試劑的配制方法
附錄D 研究生期間學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：4000058