馬度米星銨（maduramicin）是聚醚類(lèi)抗生素的一種,因其具有抗球蟲(chóng)譜廣、效價(jià)高、用量少、價(jià)格低廉、促進(jìn)增重且球蟲(chóng)不易產(chǎn)生耐藥性等諸多優(yōu)點(diǎn),廣泛用于防治肉雞球蟲(chóng)病。但其安全范圍極窄,推薦劑量與中毒劑量非常接近,常導(dǎo)致靶動(dòng)物肉雞及非靶動(dòng)物豬、牛、羊、兔和人的中毒,心肌和骨骼肌是其毒性損傷的靶器官,現(xiàn)有研究多見(jiàn)于中毒案例報(bào)道和臨床病理組織學(xué)觀察,其引起心肌和骨骼肌毒性損傷的機(jī)制尚不清楚,探究馬度米星銨如何引起雞心肌的損傷將為防控馬度米星銨導(dǎo)致的肉雞心臟毒性提供理論支撐,為促進(jìn)該類(lèi)藥物的合理使用提供參考依據(jù)。為此,本文以雞原代心肌細(xì)胞為體外研究模型,首先采用轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析馬度米星銨引起的差異表達(dá)基因,進(jìn)一步利用生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)其毒性機(jī)制,細(xì)胞炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、離子紊亂及胞漿空泡化可能是其主要機(jī)制,然后對(duì)預(yù)測(cè)機(jī)制進(jìn)行了試驗(yàn)確證,進(jìn)而闡明了馬度米星銨通過(guò)巨泡式死亡和細(xì)胞凋亡引起雞原代心肌細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。主要研究?jī)?nèi)容如下:1.馬度米星銨致雞原代心肌細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析為系統(tǒng)揭示馬度米星銨引起的雞心肌毒性機(jī)制,本章以雞原代心肌細(xì)胞為體外模型,采用RNA-seq在轉(zhuǎn)錄水平解析馬度米星銨對(duì)雞心肌... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３自噬發(fā)生的過(guò)程＿??－１０７

?馬度米星銨致雞原代心肌細(xì)胞毒性及毒性機(jī)制的研究???Ｔｏｔａｌ?ＫＮＡ樣品檢測(cè)??ｍＲＮＡ富集??雙鏈ｃＤＮＡ合成??末端修復(fù)加Ａ和接頭??片段選擇和ＰＣＲ富集??文庫(kù)質(zhì)置檢測(cè)??？?ｊ?？??，?＾??Ｉｌｌｕｍｉｎａ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ??圖１－４?ＲＮＡ－ｓｅｑ基本流程??Ｆｉｇ．?１－４?Ｔｈｅ?ｂａｓｉｃ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＲＮＡ－ｓｅｑ??３．２?ＲＮＡ－ｓｅｑ與毒理學(xué)研究??ＲＮＡ－ｓｅｑ技術(shù)的出現(xiàn)為毒理學(xué)研究帶來(lái)新方法和新思路，隨著毒理學(xué)的發(fā)??展，結(jié)合組學(xué)技術(shù)，逐漸發(fā)展成為毒理基因組學(xué)，其中轉(zhuǎn)錄組學(xué)作為重要的組??成部分對(duì)揭示毒性作用機(jī)制和鑒定生物標(biāo)志物起到非常重要的作用［１２８，１２９］。傳統(tǒng)??毒理學(xué)檢測(cè)方法以表觀指標(biāo)、組織病理變化和死亡為毒性檢測(cè)終點(diǎn)，這些方法??可以闡明毒物的毒性作用和初步機(jī)制，但對(duì)于毒性的發(fā)現(xiàn)與診斷不夠靈敏，不??能檢測(cè)低靈敏度的毒性效應(yīng)，也不能從整體水平解析毒性損傷特征。與傳統(tǒng)的??毒理檢測(cè)方法相比，基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)的改變更為靈敏與特異，ＲＮＡ－ｓｅｑ可以獲??得功能基因的信息，進(jìn)一步闡釋藥物或毒物的毒性作用機(jī)制，這無(wú)疑為新藥的??安全性評(píng)價(jià)、毒性機(jī)制研究和毒性生物標(biāo)志物等方面提供了一條重要技術(shù)路徑??［１３０－１３２］。??歷經(jīng)１０多年的發(fā)展，ＲＮＡ－ｓｅｑ技術(shù)己在生命科學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。近幾年，??隨著ＲＮＡ－ｓｅｑ成本的降低，ＲＮＡ－ｓｅｑ已廣泛應(yīng)用于環(huán)境毒理學(xué)及非模式生物的??毒性評(píng)價(jià)中｜１３３’１３４】。Ｊｏｏｓｔ?ｖａｎ?Ｄｅｌｆｔ等［１３５］于２０１３年采用ＲＮＡ－ｓｅｑ技術(shù)結(jié)合生物??１２??

二章馬度米星銨致雞原代心肌細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分豐斤???＊?？??１．２．９數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析??除ＲＮＡ－ｓｅｑ分析以外的數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Ｍｅａｎ±？Ｄ）表示，數(shù)據(jù)??統(tǒng)計(jì)使用ｓｐｓｓ?２０．０軟件，差異顯著性采用獨(dú)立樣本ｔ檢驗(yàn)和單因素方差分析??（ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡ?），尸＜０．０５表示差異顯著。ＲＴ－ｑＰＣＲ和ＲＮＡ－ｓｅｑ所得基因??表達(dá)量的相關(guān)性分析米用ｓｐｓｓ?２０．０軟件中的Ｐｅａｒｓｏｎ算法進(jìn)行分析。??２結(jié)果??２．１馬度米星銨的細(xì)胞毒性??由圖２－１可知，不同濃度的馬度＃星銨均可以抑制雞原代心肌細(xì)胞的活性，??當(dāng)不同濃度的馬度米星銨處理雞心肌細(xì)胞２４?ｈ時(shí)，０．０５和０．１?ｐｇ／ｍＬ的馬度米??星銨并不能導(dǎo)致顯著的細(xì)胞毒性（／＾＞〇．〇５）；當(dāng)濃度高于０．５｜ａｇ／ｍＬ時(shí)，馬度米??星銨處理雞心肌細(xì)胞２４、４８和７２?ｈ均可引起顯著的細(xì)胞毒性（Ｐ＜０．０５），且呈??一定的時(shí)間依賴(lài)性。為保證所取細(xì)胞樣品為典型損傷樣品，以滿足采用轉(zhuǎn)錄組??學(xué)技術(shù)分析馬度米星銨毒性機(jī)制的需要，細(xì)胞死亡率在１５？２０?％范圍最佳［１３］。??為模擬馬度米星銨的急性中毒效應(yīng)，故選用５?ｐｇ／ｍＬ的馬度米星銨處理心肌細(xì)??胞２４ｈ為最佳染毒方案，用于后續(xù)ＲＮＡ－ｓｅｑ分析。??Ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ?（ｐｇ／ｍＬ）??圖２－１馬度米星銨抑制雞原代心肌細(xì)胞活性??數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，ｎ＝５，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１表示與空白組相比差異顯著或極顯著。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ?ｏｎ?ｃｈｉｃｋｅｎ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ??Ｖ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]真菌毒素（AFB1、DON）對(duì)HepG2C3A細(xì)胞的聯(lián)合毒性及機(jī)理研究[D]. 李文竹.江南大學(xué) 2016
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本文編號(hào)：3333560