2013年初,我國首次發(fā)生H7N9禽流感病毒（AIV）跨越種間屏障感染人事件。遺傳演化分析結(jié)果表明H7N9流感病毒為三源重組病毒,其六個內(nèi)部基因均來源于H9N2禽流感病毒。截止目前,已發(fā)生五波人感染H7N9疫情,共造成1568人感染,死亡率約39%。2017年出現(xiàn)了HA蛋白裂解位點(diǎn)含有多個堿性氨基酸的高致病性H7N9流感病毒,不僅嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展,而且對人類公共衛(wèi)生安全構(gòu)成重大威脅。禽流感病毒跨越種間屏障感染人后需要獲得哺乳動物適應(yīng)性突變才可以在人體內(nèi)有效復(fù)制及傳播,其中PB2蛋白E627K突變在禽流感病毒適應(yīng)哺乳動物過程中發(fā)揮重要作用。H7N9流感病毒感染人病例中70%以上獲得了PB2蛋白E627K突變。為了深入研究H7N9流感病毒感染人后獲得PB2蛋白E627K突變的分子機(jī)制,本研究中我們在H7N9禽流感病毒背景下構(gòu)建了一系列重組及突變病毒,并在小鼠體內(nèi)檢測其獲得哺乳動物適應(yīng)性突變的能力。我們的研究結(jié)果表明,H7N9禽流感病毒的PA基因是決定其在小鼠體內(nèi)復(fù)制過程中是否發(fā)生PB2蛋白E627K突變的關(guān)鍵基因,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)H7N9禽流感病毒PA蛋白所導(dǎo)致的病毒在哺乳動物細(xì)胞上的... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３流感病毒復(fù)制調(diào)控特異的病毒及宿主因子（圖片來自Ｊａｓｏｎ?Ｓ．?Ｌｏｎｇ?（；／？／．?Ｎａｔｕｒｅ?Ｒｅｖｉｅｗｓ?Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，??２０１９）??ＦＩＧ??

我們在ＰＧ／Ｓ１４２１（Ｈ７Ｎ９）背景下構(gòu)建８株單基因替換重組病毒，每個重組病毒包含一??個來源于ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）的基因。將獲救的重組病毒經(jīng)鼻腔接種小鼠，于感染后第五天取小鼠肺??臟。首先我們檢測了所構(gòu)建的單基因替換重組病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制能力。結(jié)果如圖３．１Ａ所示，??重組病毒在小鼠體內(nèi)表現(xiàn)出不同的復(fù)制能力：含有ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）病毒ＰＢＩ基因的重組病毒在小??鼠肺臟中的復(fù)制滴度到比親本毒株ＰＧ／Ｓ１４２１（Ｈ７Ｎ９）更高；含有ＣＫ７５（Ｈ９Ｎ２）病毒的ＰＢ２、ＰＡ、??ＨＡ、ＮＡ或Ｍ的重組病毒復(fù)制滴度較親本毒株降低；而含有ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）病毒ＮＰ或ＮＳ基因??的重組病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制能力較差，在感染后第５天小鼠肺臟中未檢測到病毒。然后，我們??從感染小鼠肺臟組織研磨液提取病毒ＲＮＡ，?ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增測定重組病毒的ＰＢ２基因序列。測序??結(jié)果表明：含有ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）病毒的ＰＢ２基因、ＨＡ基因、ＮＡ基因或Ｍ基因的重組病毒在感??染小鼠第５天其ＰＢ２基因獲得了?Ｅ６２７Ｋ突變，與親本毒株ＰＧ／Ｓ１４２１（Ｈ７Ｎ９）—致（圖３．１Ｂ），含??有ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）病毒ＰＢ１基因的重組病毒在感染后第５天獲得了?ＰＢ２Ｄ７０１Ｎ突變。然而，攜帶??有ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）?ＰＡ基因的重組病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制過程中其ＰＢ２基因保持穩(wěn)定

因此我們進(jìn)行了?Ｍｉｎｉ?ｇｅｎｏｍｅ分析，以確定由ＰＧ／Ｓ１４２１（Ｈ７Ｎ９）、ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）和兩個ＰＡ單基因??替換病毒（ＰＧ／Ｓ１４２１－ＣＫ５ＰＡ、ＣＫ／５－Ｓ１４２１ＰＡ）所具有的四種ＲＮＰ組合在禽ＤＦ－１細(xì)胞上的聚合酶??活性。結(jié)果如圖３．２所示，親本毒株ＰＧ／Ｓ１４２１（Ｈ７Ｎ９）（即７ＰＢ２７ＰＢ１７ＰＡ７Ｗ）的聚合酶活性高于ＣＫ／５（Ｈ９Ｎ２）??（即９ＰＢ２９Ｐ３１９ＰＡ９ＮＰ）（源于Ｈ７Ｎ９病毒的基因片段標(biāo)記為“７”，源于親本Ｈ９Ｎ２病毒的基因片段標(biāo)記??為“９Ｍ），這也部分解釋了?Ｈ７Ｎ９流感病竭在家禽中的廣泛流行。在禽ＤＦ－１細(xì)胞中，ＰＧ／Ｓ１４２１－ＣＫ５ＰＡ??（７ｐｂ２７ｐｂｉ９ｐａ７ｎｉ＞）與親本毒株ＰＧ／Ｓ１４２１?（７ｐＢ２７ｐｂ丨７ｒ．＼７ｎｐ）相比，其聚合酶活性顯著降低，而ＣＫ／５－Ｓ１４２丨ＰＡ??（９ｐｂ２９ｐｂｉ７ｐａ９ｎｐ）與親本毒株ＣＫ／５?（９ＰＢ２９ｐｂｉ９ｉ＞ａ９Ｎｐ）相比，其聚合酶活性略有提高。這些數(shù)據(jù)表明，??ＰＧ／ＳＩ４２ＵＨ７Ｎ９）病沿的ＰＡ祛閔在禽類細(xì)胞中是Ｈ７Ｎ９流感病毒保持高聚合酶活性的重要原因。??１５〇ｉ?Ｐ＜０－０００１?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Vaccination of poultry successfully eliminated human infection with H7N9 virus in China[J]. Xianying Zeng,Guobin Tian,Jianzhong Shi,Guohua Deng,Chengjun Li,Hualan Chen.  Science China（Life Sciences）. 2018(12)



本文編號：3334041