本文關(guān)鍵詞：蘿卜硫素對(duì)2型糖尿病小鼠耳蝸毛細(xì)胞退行性變的保護(hù)作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 蘿卜硫素 硫氧還蛋白 轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 糖尿病性耳聾 毛細(xì)胞退行性變

【摘要】：目的：糖尿病性耳聾是一種以高頻為主,外毛細(xì)胞散在缺失為特征的感音神經(jīng)性耳聾。長(zhǎng)期高血糖及其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致的氧化應(yīng)激可激活多種凋亡信號(hào)通路造成耳蝸細(xì)胞的不可逆性損害,是感音神經(jīng)性耳聾發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。耳蝸的獨(dú)特結(jié)構(gòu)及維持聽(tīng)功能正常時(shí)易受到自由基的氧化損傷。大量聽(tīng)力學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)糖尿病患者毛細(xì)胞出現(xiàn)退行性變。硫氧還蛋白(thioredoxin,Trx)是體內(nèi)最主要的抗氧化劑之一,在減少細(xì)胞凋亡和抗氧化方面起著關(guān)鍵的作用。蘿卜硫素(SF)是廣泛存在于西蘭花等十字花科蔬菜及萊菔子等食／藥用植物中的抗氧化誘導(dǎo)劑。NF-E2-相關(guān)因子2(Nrf2)是核心轉(zhuǎn)錄蛋白,能結(jié)合ARE區(qū)域后調(diào)節(jié)II相代謝酶基因的轉(zhuǎn)錄。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物體內(nèi)關(guān)鍵的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)之一,參與介導(dǎo)多種細(xì)胞生物過(guò)程。研究證實(shí)SF能通過(guò)上調(diào)Trx的表達(dá)對(duì)Tub小鼠耳蝸毛細(xì)胞的退變起保護(hù)作用。本課題通過(guò)建立2型糖尿病小鼠模型,探討蘿卜硫素(SF)保護(hù)糖尿病之高糖所致的耳蝸毛細(xì)胞退行性變性的保護(hù)作用機(jī)制,以期為臨床預(yù)防和治療糖尿病性耳聾提供新理論依據(jù)及治療指導(dǎo)方案。方法：1.建立2型糖尿病動(dòng)物模型首先根據(jù)國(guó)際公認(rèn)的建模標(biāo)準(zhǔn)建立2型糖尿病小鼠模型,以隨機(jī)空腹血糖7.8mmol/L及出現(xiàn)胰島素抵抗為建模成功。將Balb/c小鼠分為2型糖尿病組(T2DM)與正常組(control)。繼之以不同劑量SF (0.5mg/kg,1mg/kg,2mg/kg)及同一劑量的SF不同給藥時(shí)間(5d,10d,15d)分別處理T2DM組小鼠后,檢測(cè)T2DM組和Control組小鼠耳蝸中Trx基因和蛋白的表達(dá)水平,以確定最佳給藥劑量和有效用藥時(shí)間。最后用SF和Trx的抑制劑(PX-12)對(duì)Control組和T2DM兩組進(jìn)行相同處理,分為對(duì)照組、治療組(SF)、和實(shí)驗(yàn)組(SF+PX-12)。2.我們通過(guò)耳蝸毛細(xì)胞琥珀酸脫氫酶(succinic dehydrogenase, SDH)染色,進(jìn)行耳蝸毛細(xì)胞計(jì)數(shù)以及耳蝸切片HE染色對(duì)耳蝸組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察分析；采用耳蝸石蠟切片免疫熒光組織化學(xué)的方法檢測(cè)Trx與ASK1在耳蝸組織的定位及表達(dá)情況：采用Real-time PCR檢測(cè)耳蝸組織中Trx及Txnip基因水平,用Western blot方法檢測(cè)小鼠耳蝸組織中Trx, Nrf2,p-Erk,及細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)蛋白激酶ASK1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：1.SF對(duì)T2DM組小鼠耳蝸組織中Trx基因和蛋白水平的影響。以不同劑量的SF(0.5mg/kg,1mg/kg,2mg/kg)處理T2DM組小鼠后,Western blot檢測(cè)Trx蛋白水平結(jié)果顯示,SF各劑量處理組與T2DM對(duì)照組比較Trx的表達(dá)均有不同程度的升高(p0.05,p0.01,p0.05)。其中以1.Omg/kg劑量組最為顯著。Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果與Western blot檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)一致,各劑量組耳蝸組織中Trx基因表達(dá)較T2DM對(duì)照組均有所上調(diào),以1mg/kg劑量組最為顯著(p0.01)。選用SF 1mg/kg劑量以不同時(shí)間(5d,10d,15d)處理T2DM組小鼠后,Real-timePCR檢測(cè)與Western blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),T2DM組小鼠耳蝸中Trx的表達(dá)水平與用藥時(shí)間成正相關(guān),其中以15天效果最佳(p0.01)。2.SF與PX-12對(duì)T2DM小鼠耳蝸毛細(xì)胞退行性變的作用及機(jī)制。2。1 SF及PX-12對(duì)T2DM小鼠耳蝸毛細(xì)胞退行性變的影響采用耳蝸毛細(xì)胞琥珀酸脫氫酶(succinic dehydrogenase, SDH)染色法,小鼠耳蝸?lái)敾刂恋谆匾韵嗟染嚯x(200um)計(jì)數(shù)毛細(xì)胞缺失數(shù),SDH染色顯色細(xì)胞為活細(xì)胞。觀察可見(jiàn)各T2DM組,距頂回70%處外毛細(xì)胞排列不規(guī)則,開(kāi)始明顯缺失。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,各T2DM組與正常組比較外毛細(xì)胞數(shù)均有不同程度的減少而內(nèi)毛細(xì)胞數(shù)減少輕微。其中T2DM對(duì)照組與正常組比較外毛細(xì)胞數(shù)顯著減少(p0.00I,n=3),內(nèi)毛細(xì)胞均數(shù)亦有所減少(p0.05,n=3)。T2DM組中單純給與SF組與T2DM對(duì)照組比較外毛細(xì)胞均數(shù)有明顯增加(p0.001,n=3),內(nèi)毛細(xì)胞數(shù)有所增加(p0.05,n=3)。T2DM組中SF和PX-12聯(lián)合作用組與單純給與SF組比較外毛細(xì)胞數(shù)減少(p0.01,n=3),內(nèi)毛細(xì)胞數(shù)也有所減少(p0.05,n=3)。從耳蝸組織HE染色切片觀察毛細(xì)胞缺失趨勢(shì)與毛細(xì)胞SDH染色計(jì)數(shù)結(jié)果一致。2.2熒光免疫組化法觀察SF與PX-12對(duì)T2DM小鼠耳蝸組織中Trx和ASK1表達(dá)的影響熒光免疫組化結(jié)果分析顯示,Trx與ASK1的表達(dá)主要位于小鼠耳蝸毛細(xì)胞中,T2DM組小鼠與正常組小鼠比較耳蝸毛細(xì)胞中Trx表達(dá)明顯減弱,而ASK1的表達(dá)明顯增強(qiáng)。T2DM組中單純給與SF組與T2DM對(duì)照組比較耳蝸毛細(xì)胞中Trx表達(dá)明顯增強(qiáng),ASK1的表達(dá)則明顯減弱。T2DM組中SF和PX-12聯(lián)合作用組與單純給與SF組比較耳蝸毛細(xì)胞中Trx的表達(dá)有所減弱,ASK1的表達(dá)有所增強(qiáng)。2.3 SF與PX-12對(duì)T2DM小鼠耳蝸中Trx、Txnip與ASK1,Nrf2與P-Erk表達(dá)的影響用Real-time PCR的方法檢測(cè)各組耳蝸組織中的Trx和Txnip的基因表達(dá)水平,檢測(cè)結(jié)果分析顯示,與正常對(duì)照組比較,T2DM組小鼠耳蝸組織中的Trx基因表達(dá)明顯下調(diào)(p0.01,n=3),Txnip基因表達(dá)明顯上調(diào)(p0.01,n=3)。單純給與SF處理的正常組小鼠與正常對(duì)照組比較其耳蝸中的Trx基因表達(dá)有所上調(diào)(p0.05n=3),Txnip的表達(dá)有所下調(diào)(p0.05,n=3)。SF與PX-12聯(lián)合處理的正常組小鼠與單純給與SF處理的正常組小鼠比較Trx基因表達(dá)有所下調(diào)(p0.05,n=3),Txnip的表達(dá)有所上調(diào)(p0.05,n=3)。單純給與SF處理的T2DM組小鼠與T2DM對(duì)照組比較其耳蝸組織中的Trx基因表達(dá)有所上調(diào)(p0.05,n=3),Txnip的表達(dá)有所下調(diào)(p0.05,n=3)。SF與PX-12聯(lián)合處理的T2DM組小鼠與單純給與SF處理的T2DM組小鼠比較Trx基因表達(dá)有所下調(diào)(p0.05,n=3),Txnip的表達(dá)有所上調(diào)(p0.05,n=3)。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,T2DM組小鼠耳蝸組織中的Trx、Nrf2和p-Erk的蛋白表達(dá)水平均有明顯下調(diào)(p0.01,p0.01,p0.05；n=3),ASK1的表達(dá)明顯上調(diào)(p0.01,n=3)。單純給與SF處理的正常組小鼠與正常對(duì)照組比較其耳蝸組織中的Trx、Nrf2和p-Erk蛋白表達(dá)均有上調(diào)(p0.05,p0.05,p0.05；n=3),ASK1的表達(dá)有所下調(diào)(p0.01,n=3)。SF與PX-12聯(lián)合處理的正常組小鼠與單純給與SF處理的正常組小鼠比較Trx、Nrf2和p-Erk表達(dá)有不同程度的下調(diào)(p0.01,p0.05,p0.05；n=3),ASKI的表達(dá)有所上調(diào)(p0.05,n=3)。單純給與SF處理的T2DM組小鼠與T2DM對(duì)照組比較其耳蝸中的Trx、Nrf2和p-Erk表達(dá)有不同程度的上調(diào)(p0.05,p0.05,p0.01；n=3),ASK1的表達(dá)有所下調(diào)(p0.05,n=3)。SF與PX-12聯(lián)合處理的T2DM組小鼠與單純給與SF處理的T2DM組小鼠比較Trx、Nrf2和p-Erk表達(dá)有不同程度的下調(diào)(p0.05,p0.01,p0.05；n=3),ASK1的表達(dá)有所上調(diào)(p0.05,n=3)。說(shuō)明SF通過(guò)作用于p-Erk/Nrf2抗氧化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上調(diào)Trx的表達(dá),抑制ASK1引起的凋亡信號(hào)通路的激活,從而對(duì)糖尿病耳蝸毛細(xì)胞的退變起保護(hù)作用。結(jié)論：1.糖尿病小鼠耳蝸底回外毛細(xì)胞丟失顯著,毛細(xì)胞中Trx表達(dá)下調(diào),而Txnip、ASK1表達(dá)明顯上調(diào)。2.SF能夠有效上調(diào)耳蝸毛細(xì)胞的Trx表達(dá)從而抑制Txnip的活性以及ASK1介導(dǎo)的下游凋亡通路的激活,對(duì)糖尿病小鼠耳蝸毛細(xì)胞的退變起到保護(hù)作用。3.p-Erk/Nrf2抗氧化酶鏈與SF介導(dǎo)Trx表達(dá)的上調(diào)有關(guān)
【關(guān)鍵詞】：蘿卜硫素 硫氧還蛋白 轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 糖尿病性耳聾 毛細(xì)胞退行性變
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.1;R764.43
【目錄】：

• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-18
• 第一部分 蘿卜硫素對(duì)2型糖尿病小鼠耳蝸毛細(xì)胞退行性變的保護(hù)作用18-29
• 前言18
• 材料和方法18-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-29
• 第二部分 蘿卜硫素對(duì)2型糖尿病小鼠耳蝸毛細(xì)胞退行性變的保護(hù)機(jī)制29-40
• 前言29
• 材料與方法29-33
• 結(jié)果33-38
• 討論38-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述45-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 附錄51-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況52
• 致謝52

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李厚勇;;耳蝸毛細(xì)胞再生的研究現(xiàn)況[J];中國(guó)眼耳鼻喉科雜志;2000年05期

2 亓衛(wèi)東;丁大連;蔣海燕;Richard J Salvi;;全耳蝸毛細(xì)胞定量分析系統(tǒng)[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2007年02期

3 刁刃,曹錫沖,汪磊,張瑞霞;計(jì)算機(jī)在計(jì)數(shù)耳蝸毛細(xì)胞中的應(yīng)用[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1991年03期

4 武文明,姜泗長(zhǎng),顧瑞,楊偉炎;在體耳蝸毛細(xì)胞電反應(yīng)記錄[J];中華耳鼻咽喉科雜志;1996年01期

5 張勤修,遲放魯,曹恒明,趙劍星,顧全保;耳蝸毛細(xì)胞分離方法的改良[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年05期

6 侯秋來(lái),丁大連,蔣海燕,Richard J.Salvi,尹紹文;慶大霉素對(duì)小鼠耳蝸毛細(xì)胞損害的離體培養(yǎng)試驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚J];中華耳科學(xué)雜志;2005年03期

7 張賢,郭夢(mèng)和,楊愛(ài)華,龍孝斌;彩超照射后胎鼠耳蝸毛細(xì)胞的定量及形態(tài)學(xué)觀察[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2005年01期

8 李婷鈺;王蘋(píng);杜波;杜寶東;;卡那霉素對(duì)離體培養(yǎng)大鼠耳蝸毛細(xì)胞損害的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年01期

9 張少?gòu)?qiáng);李勝利;閆利英;李隨勤;李白芽;朱宏亮;鄭慶印;;年齡相關(guān)性聽(tīng)力損失小鼠耳蝸毛細(xì)胞的凋亡機(jī)制[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2010年01期

10 李勝利;張正民;張少?gòu)?qiáng);劉思偉;趙謙;閆利英;朱宏亮;;蝙蝠耳蝸毛細(xì)胞損害后支持細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為再生毛細(xì)胞研究[J];中華耳科學(xué)雜志;2010年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭貴亮;周義德;鄭宏良;胡博華;;細(xì)胞內(nèi)氧化還原作用在脈沖聲誘發(fā)耳蝸毛細(xì)胞壞死中的作用[A];2010全國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 徐婭蘋(píng);管明;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為耳蝸毛細(xì)胞前體的研究[A];2006年浙江省耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 楊衛(wèi)平;胡博華;Donald Henderson;;苯乙烯致聾的耳蝸毛細(xì)胞死亡方式[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

4 翟所強(qiáng);張媛;汪學(xué)勇;宋巍;鄭貴亮;朱玉華;于寧;郭維維;胡吟燕;孫建和;高維強(qiáng);;哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞再生實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

5 李勝利;朱宏亮;劉全征;王瑋;劉平艷;史士合;李德;王福田;;純中藥制劑復(fù)聰湯對(duì)感音性聾耳蝸毛細(xì)胞修復(fù)再生的實(shí)驗(yàn)研究[A];2012年“中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)耳鼻喉科分會(huì)第18屆學(xué)術(shù)交流會(huì)暨世界中聯(lián)耳鼻喉口腔科專業(yè)委員會(huì)第4屆學(xué)術(shù)年會(huì)”中西醫(yī)結(jié)合耳鳴耳聾新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2012年

6 倪月秋;湯浩;;川芎嗪促進(jìn)豚鼠慶大霉素中毒耳蝸毛細(xì)胞再生修復(fù)作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第21屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

7 李永奇;丁大連;李鵬;蔣海燕;Richard Salvi;;小鼠順鉑耳蝸毛細(xì)胞損傷模型[A];全國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

8 劉強(qiáng)和;羅香林;耿宛平;陳晨;雷迅;劉芳賢;王雪梅;;快速老化小鼠聽(tīng)功能和耳蝸毛細(xì)胞的增齡性變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

9 郭曉;劉移民;王致;顧春暉;陳利梅;;高表達(dá)野生型和突變型SOD2耳蝸毛細(xì)胞模型的構(gòu)建[A];廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

10 倪月秋;張量;李玉芳;溫利民;符文雙;;川芎嗪對(duì)藥物耳毒性耳蝸毛細(xì)胞損傷修復(fù)的作用機(jī)制研究[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 忠霞;耳蝸毛細(xì)胞espin蛋白變異導(dǎo)致耳聾[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

2 ;加減味耳聾左慈丸能有效降低慶大霉素的耳毒性[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 曹智新;Peroxynitrite致小鼠耳蝸毛細(xì)胞損傷及凋亡機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 劉云;17-DMAG體外誘導(dǎo)HSP70并保護(hù)卡那霉素引起的耳蝸毛細(xì)胞損傷[D];華中科技大學(xué);2015年

3 毛小波;Nob1在耳蝸毛細(xì)胞損傷中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 盧娜;音猥因子通過(guò)下調(diào)pRb的表達(dá)水平促進(jìn)哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞再生[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

5 王致;耳蝸毛細(xì)胞氧化損傷microRNA與mRNA表達(dá)譜及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

6 韓宇;c-Myc在噪聲條件下對(duì)耳蝸毛細(xì)胞的作用及分子機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 陶永;STAT3信號(hào)通路調(diào)控新生小鼠耳蝸毛細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及Pmca2突變小鼠內(nèi)耳基因治療[D];華中科技大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 顧翔;AP-2蛋白在小鼠耳蝸毛細(xì)胞的表達(dá)及其調(diào)控突觸囊泡胞吞的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 扶玉珍;蘿卜硫素對(duì)2型糖尿病小鼠耳蝸毛細(xì)胞退行性變的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王海霞;小分子物質(zhì)在耳蝸毛細(xì)胞再生中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

4 王曉宇;阿米福汀對(duì)順鉑作用下耳蝸毛細(xì)胞及Fas蛋白表達(dá)的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

5 郝帥;豚鼠順鉑中毒后耳蝸毛細(xì)胞的凋亡檢測(cè)及Caspase-3的表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

6 張賢;彩超對(duì)胎鼠聽(tīng)覺(jué)發(fā)育的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 段u&;NOS抑制劑和BDNF對(duì)慶大霉素所致離體耳蝸毛細(xì)胞損傷的協(xié)同防護(hù)作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2004年

8 溫麗民;川芎嗪對(duì)藥物耳毒性耳蝸毛細(xì)胞損傷修復(fù)的作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：816322