本文關(guān)鍵詞：吉非替尼對博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化的影響

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【摘要】：研究背景博來霉素是一種抗癌類抗生素藥,屬于堿性糖肽類藥物,它的主要功能是抑制胸腺嘧啶核苷,防止胸腺嘧啶核苷參入DNA,與DNA結(jié)合,從而使DNA分解破壞。在增殖細(xì)胞的細(xì)胞周期的S期起著很重要的作用。早在1966年已被成功地用于治療各種腫瘤,包括肺癌、宮頸癌、陰道癌、食道癌、頭頸部及皮膚鱗狀癌。博來霉素的不良反應(yīng)主要是引起間質(zhì)性肺炎,肺纖維化(也稱為纖維性肺泡炎),致病可能性高達(dá)10%。吉非替尼,是一種常見的選擇性的表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑,主要適用于治療局部晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(NSCLC),或那些在此之前接受了化學(xué)治療且并不適合化療的病人。通常也能接受轉(zhuǎn)化生長因子和表皮生長因子,刺激成纖維細(xì)胞增殖,這一過程在肺纖維化的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。然而,研究表明,表皮生長因子受體抑制劑(EGFR-TKI)可以抑制表皮生長因子增殖,從而可以防止肺纖維化的形成。研究目的1.觀察吉非替尼對博來霉素導(dǎo)致的小鼠肺損傷的影響。2.通過研究博來霉素與吉非替尼的聯(lián)合用藥方案,觀察聯(lián)合用藥對HUVECs細(xì)胞生長的影響。研究方法1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)首先,構(gòu)建由博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型,用以研究吉非替尼對小鼠肺纖維化的影響。將C57BL/6小鼠分為3組：分別為控制組,博來霉素組,吉非替尼+博來霉素組�？刂平M給予氣管注射生理鹽水,博來霉素組和吉非替尼+博來霉素組給予氣管注射博來霉素,之后3周,分別用吉非替尼和鹽水給吉非替尼+博來霉素組和博來霉素組灌胃(100mg/kg體重)。3周后,處死小鼠,收集小鼠的肺組織,并研究發(fā)病機(jī)理。在整個(gè)研究期間,每天測量小鼠體重并觀察小鼠的身體情況。小鼠的肺組織取出來后,一半固定在10%的甲醛中,留做HE染色；另外一半肺組織保存在空管中,用于提取RNA和蛋白質(zhì),將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,并通過PCR和Western blotting的方法發(fā)現(xiàn)在炎性蛋白質(zhì)的差異。通過檢測MPO含量,檢測是否存在中性粒細(xì)胞及其含量,從而檢測炎性因子的活性。2.體外實(shí)驗(yàn)體外試驗(yàn)包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分組、細(xì)胞處理、細(xì)胞間培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)。分別用博來霉素、吉非替尼、博來霉素+吉非替尼三種方式刺激培養(yǎng)細(xì)胞。將培養(yǎng)的細(xì)胞分為四組：正常對照組(A)、博來霉素組(B)、吉非替尼組(C)、博來霉素+吉非替尼組(D)。分別用以下檢測方法進(jìn)行檢測：(1)MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測博來霉素和吉非替尼對細(xì)胞的影響；(2)細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn),細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測吉非替尼和博來霉素對細(xì)胞的毒性影響；(3) RT-PCR的實(shí)驗(yàn)方法來檢測博來霉素和吉非替尼對HUVECs細(xì)胞的一些炎性細(xì)胞因子的影響；(4) Western blotting的實(shí)驗(yàn)方法來檢測博來霉素、吉非替尼、博來霉素+吉非替尼對HUVECs的NF-κB和細(xì)胞粘附分子(VCAM-1)的二種蛋白水平影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠經(jīng)過21天的藥物誘導(dǎo)之后處死,解剖獲得小鼠的肺組織,小鼠解剖全程留拍照片,觀察小鼠肺部炎癥圖片,從而看出博來霉素組小鼠比吉非替尼+博來霉素組小鼠炎癥更明顯,博來霉素組小鼠可以通過吉非替尼的治療減輕或阻止肺部傷害。病理組織學(xué)結(jié)果表明,由博來霉素成功誘導(dǎo)的肺纖維化的小鼠,可通過吉非替尼抑制成纖維細(xì)胞的增殖。吉非替尼+博來霉素組的小鼠存活率遠(yuǎn)超過博來霉素組小鼠。結(jié)果還表明,吉非替尼+博來霉素組小鼠的體重明顯高于博來霉素組小鼠。吉非替尼+博來霉素組小鼠的體重增長幾乎與控制組小鼠的體重增長相當(dāng)。RT-PCR結(jié)果表明,博來霉素組小鼠炎癥標(biāo)記物TNF-α,IL-1β和IFNγ明顯高于吉非替尼+博來霉素組。博來霉素組與控制組相比,TNF-α,IL-1β和IFNγ的mRNA的表達(dá)水平更高,而吉非替尼組,這些炎癥標(biāo)記物的表達(dá)水平明顯減少。Western blotting結(jié)果表明,博來霉素組小鼠的NF-κB的蛋白和細(xì)胞粘附分子(VCAM-1)表達(dá)水平明顯高于控制組和吉非替尼組。且對照組小鼠的蛋白表達(dá)水平低于吉非替尼組。2.體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果MTT方法檢測吉非替尼、博來霉素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和毒性作用：(1)細(xì)胞增殖作用：博來霉素組值高于正常對照組組(P0.05),博來霉素組OD值顯著高于博來霉素+吉非替尼組(P0.05)。 (2)細(xì)胞毒性作用,檢測結(jié)果顯示各組差異并不明顯。而細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,博來霉素對HUVECs細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用,而博來霉素+吉非替尼對HUVECs的細(xì)胞抑制效果并不明顯,其細(xì)胞毒性和凋亡方面也沒有顯著影響(P0.05)。RT-PCR的檢測結(jié)果：(1)HUVECs細(xì)胞炎性因子mRNA水平博來霉素組與正常對照組相比,博來霉素組的細(xì)胞炎性因子如白細(xì)胞介素-6、CXCL-2、白細(xì)胞介素-8、MCP-1.的mRNA水平明顯高于正常對照組(P0.05)。(2)博來霉素+吉非替尼組細(xì)胞的炎性因子白細(xì)胞介素-6、CXCL-2、白細(xì)胞介素-8的mRNA水平明顯低于博來霉素組(P0.05)。(3)MCP-1的mRNA水平吉非替尼組顯著高于正常對照組(P0.05),博來霉素+吉非替尼組顯著高于博來霉素組(P0.05)。以上結(jié)果表明在博來霉素刺激下,吉非替尼能夠有效的抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎性細(xì)胞因子(MCP-1除外)的分泌。Western blotting方法檢測博來霉素和吉非替尼對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白的表達(dá)情況結(jié)果如下：(1)正常對照組和吉非替尼組相比,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的NF-κ B和VCAM-1的蛋白表達(dá)量明顯增高(P0.05)。(2)博來霉素組和博來霉素+吉非替尼組相比,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的NF-κB、VCAM-1表達(dá)量也明顯上升(P0.05),以上結(jié)果表明博來霉素可以使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的NF-κB、VCAM-1蛋白的表達(dá)出現(xiàn)明顯的上調(diào)作用,但此作用可以被吉非替尼抑制。結(jié)論體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在小鼠體內(nèi),吉非替尼可以減弱博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化,并通過表皮生長因子的受體酪氨酸激酶抑制劑的作用,選擇性地抑制信號傳導(dǎo)通路而發(fā)揮作用,即抑制間質(zhì)細(xì)胞的增殖以防止肺纖維化。因此可以推斷,人肺纖維化治療過程中,抑制靶向酪氨酸激酶受體的作用可能是關(guān)鍵所在。體外實(shí)驗(yàn)表明,通過檢測博來霉素和吉非替尼對HUVECs細(xì)胞的增殖和毒性的影響以及多種細(xì)胞因子、細(xì)胞通路蛋白(NF-κB)、細(xì)胞黏附分子(VCAM-1)等的表達(dá)情況,可以確定吉非替尼可以對博來霉素誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞增殖和多種細(xì)胞因子的分泌都有很強(qiáng)的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：博來霉素 吉非替尼 肺損傷 HUVECs 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要5-9
• Abstract9-13
• 前言13-14
• 一 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)14-33
• 材料和方法14-24
• 1.儀器和材料14-17
• 2.試驗(yàn)方法17-23
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 結(jié)果24-30
• 實(shí)驗(yàn)討論30-32
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)論32-33
• 二 體外實(shí)驗(yàn)33-50
• 1.材料與方法33-36
• 2.方法36-43
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-47
• 實(shí)驗(yàn)討論47-49
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 綜述55-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 附錄65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67-68
• 個(gè)人簡歷68

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1 陸書生;孫德彬;孫蕾;;吉非替尼治療肺癌16例臨床分析[J];臨床肺科雜志;2008年01期

2 鐘延霞;陳艷雪;王寶君;;反相高效液相色譜法測定吉非替尼的含量[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年04期

3 許坤;;吉非替尼在老年非小細(xì)胞肺癌中的療效觀察[J];中華全科醫(yī)學(xué);2012年12期

4 玄香蘭;安昌善;周彩存;;肝細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)敏感非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對吉非替尼耐藥及機(jī)制的研究[J];中國肺癌雜志;2013年01期

5 李小龍;黨亞正;陸婉玲;;低分割放療聯(lián)合吉非替尼治療老年非小細(xì)胞肺癌療效觀察[J];西部醫(yī)學(xué);2013年09期

6 王燕;王穎;王彬;王子平;張湘茹;儲大同;孫燕;;吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的初步結(jié)果[J];中國肺癌雜志;2006年05期

7 陳玲;陳強(qiáng);葉韻斌;;吉非替尼敏感性預(yù)測指標(biāo)的研究現(xiàn)狀[J];中國新藥與臨床雜志;2006年11期

8 David W Sharp;接英;馬建華;;由吉非替尼所引發(fā)的持續(xù)性討論[J];科學(xué)觀察;2006年06期

9 徐朝江;王卓;姚遠(yuǎn)兵;;吉非替尼治療肺癌的研究進(jìn)展[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2007年03期

10 王春敏;李煒;仇綴百;;靶向抗腫瘤藥物吉非替尼的臨床研究進(jìn)展[J];中國臨床藥學(xué)雜志;2007年02期

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1 李陶;李玉;;吉非替尼,厄羅替尼,�？颂婺嵩跐�(jì)南地區(qū)2家三甲醫(yī)院的應(yīng)用調(diào)查[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 徐瑞彤;束永前;;氟維司群逆轉(zhuǎn)耐吉非替尼非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株耐藥性的機(jī)制探討[A];2010’全國腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

3 張琳琳;吳志浩;尤嘉琮;李洋;劉彬;祖玲玲;李雪冰;常銳;周清華;;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在尼古丁誘導(dǎo)肺癌吉非替尼獲得性耐藥中的作用及分子機(jī)制[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2013年

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5 陳雪琴;陳達(dá)棟;李鑫;潘月龍;;吉非替尼所致嚴(yán)重肝損害后再使用一例[A];2013年第六屆國家級分子靶點(diǎn)藥物治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班暨浙江省腫瘤化療學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

6 王芳;付占昭;顧濤;高立明;;吉非替尼耐藥的非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移繼續(xù)原藥治療有效的4例報(bào)道[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 傅健飛;王蓓;;吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌敏感性預(yù)測指標(biāo)[A];腫瘤化學(xué)治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2007年

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1 ;吉非替尼：對東方人群情有獨(dú)鐘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

2 記者 靖九江;我國研究肯定吉非替尼治療肺癌效果[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

3 馮友根;靶向治療腫瘤藥吉非替尼[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

4 凌棟;國際臨床腫瘤專家高度評價(jià)�？颂婺醄N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

5 盛文;吉非替尼增加腫瘤出血發(fā)生率[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

6 ;吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌有成本效益[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

7 本報(bào)特約撰稿人 陸志誠;進(jìn)入靶向抗癌新時(shí)代[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

8 侯嘉;關(guān)于吉非替尼的SIGN研究[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

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1 董嵩;依維莫司聯(lián)合吉非替尼抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的效果和機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

2 潘馳;吉非替尼耐藥型非小細(xì)胞肺癌中順鉑聯(lián)合吉非替尼的協(xié)同作用機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 平偉;MicroRNA-181a通過靶向GAS7對非小細(xì)胞肺癌吉非替尼敏感性的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

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6 王平;吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌的臨床療效和預(yù)測因素分析及其致肺纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

7 陳佳;成纖維細(xì)胞對NSCLC細(xì)胞HCC827吉非替尼敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制的探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 王燕;吉非替尼靶向治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床療效預(yù)測和預(yù)后因素研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

9 劉雨桃;吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌的療效與生存分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

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1 鄭悅;康萊特注射液聯(lián)合吉非替尼對人肺腺癌NCI-H1975細(xì)胞株的作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：765112