本文關(guān)鍵詞：肝復(fù)康和丹參對(duì)肝纖維化wnt經(jīng)典通路的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:wnt/β-catenin是一種能維持組織器官穩(wěn)態(tài)的高度保守的信號(hào)系統(tǒng)。近來研究顯示異常wnt/β-catenin信號(hào)通路與肝臟纖維組織增生的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系,表明它可能是中醫(yī)藥物作用于肝臟纖維化新的治療靶點(diǎn)。肝復(fù)康是我校病理生理教研室經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)總結(jié)出的中藥防治肝纖維化經(jīng)驗(yàn)方。它具有改善肝臟功能、延緩脂肪變性等效用。丹參是一種具有改善肝臟組織微循環(huán),促進(jìn)細(xì)胞代謝的單味中藥。CCL4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型飼養(yǎng)一段時(shí)間后,取大鼠肝臟組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。模型組、肝復(fù)康治療組和丹參治療組的比較是為了觀察肝復(fù)康和丹參是否能改善肝纖維化病理學(xué)形態(tài)結(jié)構(gòu),減少肝星狀細(xì)胞活化標(biāo)志α平滑肌肌動(dòng)蛋白的含量,抑制促纖維化通路wnt/β-catenin靶基因的表達(dá)。正常對(duì)照組、肝復(fù)康對(duì)照組和丹參對(duì)照組的比較是研究肝復(fù)康和丹參能否對(duì)正常肝臟wnt經(jīng)典通路產(chǎn)生活化影響而有促肝纖維化毒性。本次試驗(yàn)通過以上六個(gè)組別的設(shè)立來探討肝復(fù)康和丹參對(duì)肝纖維化wnt/β-catenin的作用機(jī)制并對(duì)丹參和肝復(fù)康干預(yù)肝纖維化wnt/β-catenin通路的效果進(jìn)行比較。大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供60只健康SD大鼠,清潔級(jí),體重200-250克(雌雄不限)。正常喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為丹參治療組(D)、肝復(fù)康對(duì)照組(GC)、丹參對(duì)照組(DC)、正常對(duì)照組(C)、模型組(M)和肝復(fù)康治療組(MG)各10只。除對(duì)照組外,其余大鼠每周兩次皮下注射橄欖油稀釋的10%的CCl4溶液(5ml/kg),共8周。肝復(fù)康對(duì)照組、丹參對(duì)照組和正常對(duì)照組以同樣方法皮下注射生理鹽水共8周。藥物對(duì)照組、丹參治療組和肝復(fù)康治療組于造模第四周起開始分別用丹參2.5ml/kg/天和肝復(fù)康4.16ml/kg/天灌胃大鼠,持續(xù)到第8周。肝復(fù)康和丹參藥物濃度分別為315mg/kg和250mg/kg。以上各劑量藥物均溶于10ml/kg的生理鹽水中。于8周末處死各組大鼠,即刻切取肝組織。一部分用10%的甲醛固定并制成石蠟切片,HE染色后光鏡下觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)。另一部分于-80℃冰箱保存用于分子生物學(xué)檢測。免疫組織化學(xué)法觀察和定位α平滑肌肌動(dòng)蛋白的分布、表達(dá)及含量,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Tcf-4、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、wnt1、wnt3a的表達(dá)水平。β-連環(huán)蛋白用免疫蛋白印跡(Western blot)方法檢測。SPSS17.0軟件包應(yīng)用多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。P0.05為差異有意義,P0.01為差異有顯著性意義。方法:結(jié)果:觀察各組大鼠精神狀態(tài),進(jìn)食及運(yùn)動(dòng)情況。處死后觀察各組大鼠大體肝臟情況。HE染色結(jié)果顯示模型組大鼠肝細(xì)胞水腫和脂肪變性,假小葉形成。丹參對(duì)照組、肝復(fù)康對(duì)照組和正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完整。肝復(fù)康治療組肝小葉結(jié)構(gòu)明顯改善,細(xì)胞脂肪變性減少。丹參治療組效果不明顯。免疫組化半定量顯示肝復(fù)康治療組大鼠肝組織α-SMA的累計(jì)光密度值明顯低于模型組并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),丹參治療組大鼠肝組織α-SMA的累計(jì)光密度值與模型組無顯著性差異,丹參對(duì)照組、肝復(fù)康對(duì)照組和正常對(duì)照組三者α-SMA的累計(jì)光密度值無顯著性差異。模型組α-SMA較丹參對(duì)照組、正常對(duì)照組、肝復(fù)康對(duì)照組顯著增加(P0.01)。CCL4處理過的模型組進(jìn)行RT-PCR結(jié)果顯示,wnt1、wnt3a、Cyclin D1、Tcf-4、β-catenin的m RNA較丹參對(duì)照組、正常對(duì)照組、肝復(fù)康對(duì)照組顯著增加(P0.01),肝復(fù)康對(duì)照組、丹參對(duì)照組和正常對(duì)照組三者比較無顯著性差異,肝復(fù)康治療組m RNA比模型組明顯下降(P0.05),丹參治療組與模型組比較無顯著性差異。Western blot結(jié)果顯示β-catenin在肝復(fù)康對(duì)照組、丹參對(duì)照組和正常對(duì)照組表達(dá)最少,對(duì)照組表達(dá)明顯低于丹參治療組與模型組(P0.01),肝復(fù)康治療組與模型組相比表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。結(jié)論:1.肝復(fù)康和丹參對(duì)正常大鼠肝臟組織wnt經(jīng)典通路無影響。2.肝復(fù)康能抑制wnt經(jīng)典通路靶基因的表達(dá)來達(dá)到延緩脂肪變性和抑制纖維細(xì)胞增殖的目的。3.中藥肝復(fù)康抑制大鼠肝纖維化程度比丹參效果理想。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化 wnt經(jīng)典信號(hào)通路 肝復(fù)康 丹參
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-14
• 材料和方法14-22
• 1.材料14-15
• 1.1 藥物14
• 1.2 動(dòng)物14-15
• 1.3 主要試劑15
• 1.4 主要儀器15
• 1.5 主要應(yīng)用軟件15
• 2.方法15-22
• 2.1 藥物的制備15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制備、分組及處理16
• 2.3 免疫組織化學(xué)分析16-18
• 2.4 肝組織逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）18-20
• 2.5 肝組織總蛋白的提取及Western印跡雜交20-22
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22
• 結(jié) 果22-30
• 1.肝組織形態(tài)學(xué)變化22-24
• 2.中藥肝復(fù)康和丹參對(duì)α-SMA蛋白的表達(dá)的影響24-26
• 3.經(jīng)典wnt通路中代表性的wnt配體的表達(dá)26-27
• 4.經(jīng)典wnt通路β-catenin和轉(zhuǎn)錄因子Tcf-4 的表達(dá)27-28
• 5.經(jīng)典wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路靶基因CyclinD1的表達(dá)28-29
• 6.Western blot檢測wnt/β-catenin中β-catenin的表達(dá)29-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 文獻(xiàn)綜述39-53
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況53-54
• 致謝54-55

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本文編號(hào)：382345