本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路中相關(guān)因子在自發(fā)性乳腺腫瘤中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳腺癌如今作為女性最常見、死亡率較高的惡性腫瘤之一,受到了廣泛的關(guān)注。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡通路作為最新發(fā)現(xiàn)的凋亡通路,需要了解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路中一些相關(guān)的重要因子的變化情況,了解其作用機(jī)制及其相互之間的關(guān)系,為臨床乳腺癌的檢測及治療找到新的靶點(diǎn)。本文運(yùn)用SD大鼠自發(fā)乳腺腫瘤模型,在對造模乳腺組織進(jìn)行病理學(xué)分析的基礎(chǔ)上,結(jié)合內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路中各重要相關(guān)因子的蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)結(jié)果,研究各因子在自發(fā)性乳腺腫瘤的表達(dá)情況,分析這些因子在自發(fā)性乳腺腫瘤中的作用。通過對130只(雌雄對半)3-4周齡SPF級SD大鼠進(jìn)行造模,飼養(yǎng)60周后進(jìn)行大體解剖,收集所有乳腺部位有腫塊或異常的乳腺組織,并保留部分肉眼未見病變的組織,所收集的組織分別用4%的多聚甲醛和液氮固定保存。通過對收集的乳腺組織進(jìn)行組織切片并作H.E染色觀察其病理變化,參考乳腺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行簡單的組織學(xué)分類；然后運(yùn)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測Calpain-2、GRP78、Bax、jNK、Caspase-3、Caspase-12、CHOP、Bcl-2的蛋白表達(dá)及其分布,Calpain-2、GRP78、Bax、JNK、Caspase-3、Caspase-12、CHOP的mRNA表達(dá)水平通過熒光定量PCR法檢測。實驗結(jié)果如下：大體解剖和病理觀察結(jié)果顯示,雄性大鼠在此次實驗中未見乳腺腫瘤的發(fā)生,而雌性大鼠腫瘤的發(fā)生率為21.54%(14/65),其中乳腺纖維腺瘤發(fā)生率為10.77%(7/65),乳腺腺癌、乳腺乳頭狀癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生率分別為4.62%(3/65)、3.08%(2/65)和3.08%(2/65)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示Calpain-2、CHOP、JNK、Caspas-12、Caspase-3和Bax這六個因子的蛋白表達(dá)量與對照組相比,在良性組和惡性組中均有明顯的減少,且除了Calpain-2和JNK兩個因子的良性組與其對照組的差異分別為顯著(P0.05)和無顯著差異(P0.05)外,其余的差異均為極顯著(P0.01),且這六個因子在惡性組中的表達(dá)也比良性組低(P0.01)。相反,GRP78和Bcl-2兩個因子在實驗組中的蛋白表達(dá)量與對照組相比則是明顯增加的(P0.01),且良性組與惡性組的組間差異也很明顯(P0.01)。根據(jù)熒光定量PCR與免疫組織化學(xué)兩者的結(jié)果可以看出,各因子的變化趨勢是相一致的,表明各因子的蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平是一致的。且各因子的蛋白和mRNA的變化與組織病變程度的相關(guān)性分析結(jié)果顯示：Bax、CHOP、Caspase-12和Caspase-3這四個因子與乳腺組織的病變程度相關(guān)性最大。通過對上述結(jié)果分析表明：大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤的發(fā)生與性別密切相關(guān),可能與飼養(yǎng)的周期有著一定的聯(lián)系,且在雌性中良性腫瘤和惡性腫瘤的發(fā)生例數(shù)相同,但是良性腫瘤僅發(fā)生了乳腺纖維腺瘤一類病變,而惡性腫瘤在病理類型上表現(xiàn)出多樣性。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路參與了SD大鼠乳腺腫瘤的發(fā)生,該通路中關(guān)鍵因子的蛋白表達(dá)水平與mRNA表達(dá)水平一致。尤其是Bax、CHOP、 Caspase-12和Caspase-3這四個因子的變化尤為顯著,可為臨床乳腺腫瘤的早期診斷和靶向治療提供新的方向。
【關(guān)鍵詞】：SD大鼠 乳腺腫瘤 免疫組織化學(xué) 熒光定量PCR 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-11
• 一 文獻(xiàn)綜述11-18
• 1 乳腺腫瘤與細(xì)胞凋亡11-12
• 2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)性死亡途徑12-15
• 2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激12-13
• 2.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的啟動機(jī)制13
• 2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑13-15
• 3 相關(guān)因子的研究進(jìn)展15-17
• 3.1 GRP78的研究進(jìn)展15
• 3.2 CALPAIN-2的研究進(jìn)展15-16
• 3.3 CASPASE-12的研究進(jìn)展16
• 3.4 CASPASE-3的研究進(jìn)展16
• 3.5 CHOP的研究進(jìn)展16-17
• 3.6 JNK的研究進(jìn)展17
• 3.7 BCL-2和BAX的研究進(jìn)展17
• 4 本課題研究目的及意義17-18
• 二 實驗內(nèi)容18-44
• 1 實驗材料18-22
• 1.1 主要試劑及其配制18-19
• 1.2 主要儀器19
• 1.3 實驗器材及耗材19-20
• 1.4 實驗動物20-22
• 1.4.1 實驗動物20
• 1.4.2 選擇動物理由20
• 1.4.3 動物飼養(yǎng)環(huán)境20-21
• 1.4.4 檢疫與馴化21
• 1.4.5 飼料與飲用水21
• 1.4.6 麻醉劑21
• 1.4.7 臨床癥狀的觀察21-22
• 2 試驗方法22-27
• 2.1 大體解剖22
• 2.2 石蠟切片及常規(guī)H.E染色22
• 2.3 病理觀察及組織學(xué)分類22
• 2.4 免疫組織化學(xué)法22-23
• 2.5 熒光定量PCR23-27
• 2.5.1 組織RNA提取23-24
• 2.5.2 合成cDNA24
• 2.5.3 待測基因?qū)崟r定量PCR24-26
• 2.5.4 擴(kuò)增產(chǎn)物特異性檢測及待測基因表達(dá)量分析26-27
• 2.6 統(tǒng)計分析27
• 3 試驗結(jié)果27-39
• 3.1 大體解剖結(jié)果27-29
• 3.2 病理組織學(xué)觀察及分類29-32
• 3.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果32-35
• 3.3.1 蛋白的表達(dá)部位32-34
• 3.3.2 蛋白的表達(dá)量分析34-35
• 3.4 熒光定量PCR結(jié)果35-39
• 3.4.1 RNA完整性及純度35-36
• 3.4.2 引物特異性36
• 3.4.3 基因的mRNA表達(dá)36-39
• 4 分析39-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 致謝52

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3 記者 熊燕;樹，

本文編號：378099