手足口�。╤and,foot,mouth diseases,HFMD）已成為我國發(fā)病率較高的丙類傳染病。人腸道病毒71型（EV-71）、柯薩奇病毒A組、B組、�？刹《揪餒FMD。2008年HFMD在我國爆發(fā)流行,同年被納入傳染病防治法進行管理和檢測。隨著EV-71疫苗的上市,重癥HFMD病例明顯減少。但是自2012年以來我國由非EV-71、非柯薩奇病毒A16型（CV-A16）引起的HFMD爆發(fā)逐漸增多。在北京、山東、廣州、湖南、福州和深圳等省市已超過50%,并且在部分地區(qū)達到了80%以上。根據(jù)2018年中國疾病控制中心（CDC）發(fā)布的HFMD病例數(shù)據(jù)顯示排除EV-71和CV-A16,柯薩奇病毒A6型（CV-A6）和柯薩奇病毒A10型（CV-A10）占比升高,柯薩奇病毒A2型（CV-A2）、柯薩奇病毒A5型（CV-A5）的病例開始增加。而本研究樣品的來源湖北襄陽地區(qū),基于EV-71疫苗干預的背景下,2016-2017年期間HFMD患兒的3216份臨床樣本中分析得知CV-A5的發(fā)病率增高至4.57%。為了降低HFMD的發(fā)病率,在EV-71疫苗基礎上研發(fā)多價HFMD疫苗勢在必行。但CV-... 

【文章來源】：武漢生物制品研究所湖北省

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一章 實驗材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 病毒,細胞
        1.2 質(zhì)粒,克隆測序用引物,菌株
        1.3 實驗動物
    2 實驗試劑
    3 常規(guī)實驗試劑的配置方法
        3.1 細菌培養(yǎng)相關試劑
        3.2 SDS-PAGE及 WB相關試劑
        3.3 核酸電泳相關試劑
        3.4 IFA實驗試劑
        3.5 細胞,病毒培養(yǎng)相關試劑
    4 實驗儀器設備
    5 實驗方法
        5.1 GST-VP1-ΔN56,GST-VP2-ΔN25,GST-VP3-ΔN8 多克隆抗體的制備
        5.2 細胞培養(yǎng)
        5.3 病毒傳代
        5.4 基于RD/Vero細胞基質(zhì)的相關病毒滴定
        5.5 CV-A5在昆明鼠體內(nèi)適應性傳代
        5.6 基于Vero細胞基質(zhì)CV-A5 疫苗候選株的篩選,構建,拯救及免疫原性研究
        5.7 CV-A5疫苗候選株生物學特性和免疫原性研究
        5.8 CV-A5主動免疫保護模型的建立
第二章 CV-A5-VP1、VP2、VP3、FP兔多克隆抗體的制備及應用
    1 結果
        1.1 構建pGEX-6p-1-VP1-ΔN56、pGEX-6p-1-VP2-ΔN119、pGEX-6p-1-VP3-ΔN8重組質(zhì)粒
        1.2 GST-VP1-ΔN56、GST-VP2-ΔN119、GST-VP3-ΔN8 重組融合蛋白可溶性分析
        1.3 Rb-α-VP1、Rb-α-VP2、Rb-α-VP3、Rb-α-FP多克隆抗體效價測定
        1.4 Rb-α-VP1、Rb-α-VP2、Rb-α-VP3、Rb-α-FP多克隆抗體的特異性分析
        1.5 多克隆抗體免疫熒光鑒定
    2 小結
第三章 CV-A5在小鼠體內(nèi)進行適應性傳代
    1 結果
        1.1 CV-A5-M14的篩選過程
        1.2 CV-A5-M14感染14日齡昆明鼠最優(yōu)的感染途徑選擇
        1.3 CV-A5-M14 對昆明鼠和Balb/C鼠敏感性比較
        1.4 CV-A5-M14 LD_(50) 測定
        1.5 CV-A5-M14-611,CV-A5-M14-111 兩克隆株毒力比較
        1.6 CV-A5-M14-611,CV-A5-M14-111 全基因組序列分析
    2 小結
第四章 CV-A5 疫苗候選株篩選,感染性c DNA的構建及病毒拯救
    1 結果
        1.1 PBR322-CV-A5-rN4,PBR322-CV-A5-rN20 重組質(zhì)粒構建及線性化
        1.2 體外轉(zhuǎn)錄vRNA
        1.3 病毒轉(zhuǎn)染Vero細胞,及連續(xù)傳代
        1.4 CV-A5-N4-P3,CV-A5-N20-P3 病毒原毒株,拯救株病毒滴度比較
        1.5 CV-V5-vN4-P3,CV-A5-vN20-P3 疫苗候選株生長曲線分析
        1.6 CV-V5-vN4-P3,CV-A5-vN20-P3 全序列比較
    2 小結
第五章 CV-A5 Vero細胞基質(zhì)抗原純化及免疫原性研究
    1 實驗結果
        1.1 CsCl梯度離心純化CV-A5 病毒顆粒
        1.2 TEM,SDS-PAGE,WB鑒定病毒顆粒
        1.3 CV-A5 抗原產(chǎn)量比較及EP、FP、DP比例計算
        1.4 中和毒的滴度測定
        1.5 中和毒的鑒定
        1.6 CV-A5免疫原性實驗
        1.7 CV-A5-3487 株免疫血清與CV-A5 Swartz株,EV-71 的交叉中和反應
    2 小結
第六章 主動免疫保護實驗
    1 結果
        1.1 14日齡昆明鼠主動免疫保護實驗存活率、臨床評分和體重變化
        1.2 RNA標準品制備
        1.3 病毒載量的測定
        1.4 主動免疫保護模型小鼠中和血清效價測定
        1.5 組織病理切片分析
        1.6 免疫組化切片分析
    2 小結
第七章 總結,討論與后續(xù)實驗計劃
    1 總結和討論
    2 研究意義
    3 下一步的工作計劃
參考文獻
附錄
在讀期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3632260