有氧糖酵解作為腫瘤細(xì)胞特有的一種代謝模式,成為抗腫瘤治療研究的熱點。但是,許多研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞能夠在有氧糖酵解受損時存活下來。除了有氧糖酵解之外,“谷氨酰胺成癮”是腫瘤細(xì)胞代謝的第二大特點。在腫瘤細(xì)胞中谷氨酰胺產(chǎn)生的谷氨酸具有多種代謝途徑,包括被腫瘤細(xì)胞排出胞外以換取胱氨酸,參與生成抗氧化劑谷胱甘肽（glutathione,GSH）以及轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸（α-ketoglutarate,α-KG）進(jìn)入三羧酸循環(huán)（Tricarboxylic acid cycle,TCA）供能。研究表明,膠質(zhì)瘤細(xì)胞的有氧糖酵解與谷氨酰胺代謝具有協(xié)同效應(yīng)以滿足腫瘤細(xì)胞對生物能和生物合成的需求。因此,更好地理解腫瘤細(xì)胞有氧糖酵解與谷氨酰胺代謝之間的關(guān)系可能會找到新的治療方案。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞糖酵解或剝奪葡萄糖,谷氨酸外排異常增加。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),抑制糖酵解或葡萄糖饑餓會誘導(dǎo)谷氨酸/胱氨酸反向轉(zhuǎn)運蛋白xCT（glutamate/cystine antiporter xCT或SLC7A11）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamate cysteine synthase,γ-GCS）... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤研究現(xiàn)狀
        1.1.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤概述
        1.1.2 神經(jīng)膠質(zhì)瘤的臨床表現(xiàn)
        1.1.3 神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療現(xiàn)狀和進(jìn)展
    1.2 腫瘤細(xì)胞的代謝重編程
        1.2.1 代謝重編程概述
        1.2.2 有氧糖酵解與腫瘤細(xì)胞的關(guān)系
        1.2.3 谷氨酸代謝與腫瘤細(xì)胞的關(guān)系
    1.3 腫瘤細(xì)胞氧化還原平衡
        1.3.1 腫瘤細(xì)胞氧化還原平衡概述
        1.3.2 谷氨酸胱氨酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)與腫瘤細(xì)胞的關(guān)系
        1.3.3 還原型谷胱甘肽與腫瘤細(xì)胞的關(guān)系
    1.4 論文的設(shè)計思路
        1.4.1 研究內(nèi)容與意義
        1.4.2 實驗流程圖
        1.4.3 研究的創(chuàng)新點
第二章 OPA衍生化檢測膠質(zhì)瘤胞外谷氨酰胺和谷氨酸
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 細(xì)胞株
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 相關(guān)試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸
        2.3.2 HPLC檢測OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸的標(biāo)準(zhǔn)品
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸最佳波長的確定
        2.4.2 HPLC檢測OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸的標(biāo)準(zhǔn)品
    2.5 討論
第三章 糖酵解阻斷時谷氨酸代謝回補(bǔ)維持氧化還原平衡
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細(xì)胞株
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 實驗儀器
        3.2.4 相關(guān)試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 葡萄糖和乳酸含量的檢測
        3.3.3 谷氨酸含量的檢測
        3.3.4 實時熒光定量PCR檢測mRNA水平
        3.3.5 蛋白質(zhì)免疫印跡分析
        3.3.6 谷氨酸脫氫酶（GLUD1）活性的檢測
        3.3.7 還原型谷胱甘肽（GSH）含量的檢測
        3.3.8 活性氧（ROS）含量的檢測
        3.3.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 抑制糖酵解降低葡萄糖消耗并減少乳酸分泌
        3.4.2 糖酵解阻斷時谷氨酸外排增多
        3.4.3 抑制糖酵解促進(jìn)xCT和γ-GCS的轉(zhuǎn)錄水平升高
        3.4.4 抑制糖酵解上調(diào)xCT和γ-GCS的蛋白表達(dá)并降低GLUD1 活性
        3.4.5 糖酵解阻斷時谷氨酸代謝回補(bǔ)維持氧化還原平衡
    3.5 討論
第四章 阻斷谷氨酸的氧化還原途徑增強(qiáng)糖酵解抑制劑敏感性
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細(xì)胞株
        4.2.2 實驗試劑
        4.2.3 實驗儀器
        4.2.4 相關(guān)試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 MTT檢測細(xì)胞增殖
        4.3.3 還原型谷胱甘肽（GSH）含量的檢測
        4.3.4 活性氧（ROS）含量的檢測
        4.3.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 糖酵解抑制劑聯(lián)合xCT或γ-GCS的抑制劑降低谷胱甘肽水平
        4.4.2 糖酵解抑制劑聯(lián)合xCT或γ-GCS的抑制劑降低細(xì)胞活力
    4.5 討論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 縮略語
附錄2 實驗儀器
附錄3 相關(guān)溶液的配制
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式



本文編號：3160745