目的:1.構(gòu)建大鼠DGKγ-shRNA慢病毒表達(dá)載體;2.探究甘油二酯激酶γ（DGKγ）對神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）增殖、遷移的影響。方法:1.同源重組法構(gòu)建大鼠DGKγ-shRNA慢病毒表達(dá)載體,包裝產(chǎn)生慢病毒并感染原代培養(yǎng)的大鼠NSCs,RT-qPCR和Western blotting法檢測大鼠NSCs內(nèi)DGKγmRNA和蛋白的表達(dá)。2.CCK-8法和神經(jīng)球計(jì)數(shù)檢測感染DGKγ-shRNA、PKC激動(dòng)劑PMA和DGK抑制劑R59949處理后NSCs的增殖情況,并顯微測量各組NSCs的遷移距離。結(jié)果:1.大鼠DGKγ-shRNA慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建及鑒定:慢病毒感染NSCs 48h后鏡下觀察,DGKγ-shRNA組和Scramble組NSCs均有效感染慢病毒,發(fā)出綠色熒光。RT-qPCR和Western blotting結(jié)果顯示,DGKγ-shRNA組DGKγmRNA和蛋白表達(dá)顯著低于Scramble組（均P<0.001）。2.DGKγ-shRNA對NSCs的增殖影響:CCK-8法檢測結(jié)果顯示,shRNA干擾導(dǎo)致的NSCs內(nèi)DGKγ低表達(dá),細(xì)胞增殖能力顯著降低（P<0.05）;... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 大鼠NSCs原代培養(yǎng)及純化
        1.2.2 NSCs的鑒定
        1.2.3 shRNA的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.4 構(gòu)建載體質(zhì)粒
        1.2.5 慢病毒制備
        1.2.6 NSCs的分組處理
        1.2.7 RT-qPCR
        1.2.8 Western blotting
        1.2.9 NSCs增殖檢測
        1.2.10 NSCs遷移檢測
        1.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 NSCs原代培養(yǎng)及鑒定
    2.2 DGKγ-shRNA慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建
    2.3 DGKγ-shRNA慢病毒在NSCs的表達(dá)
    2.4 DGKγ低表達(dá)抑制了NSCs的增殖
    2.5 DGKγ低表達(dá)抑制了NSCs的遷移
3 討論
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3089090