發(fā)布時(shí)間：2021-02-15 02:38

　　目的研究前列腺癌來(lái)源的外泌體是否通過(guò)上調(diào)趨化因子配體12（CXCL12）的特異性受體4（CXCR4）的表達(dá)從而促進(jìn)MDSCs向腫瘤微環(huán)境的聚集,并探索其可能的機(jī)制。方法超高速離心法提取外泌體,電鏡觀察外泌體形態(tài),WB檢測(cè)表面標(biāo)志蛋白。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠不同時(shí)間腫瘤組織中MDSCs比例;正常小鼠尾靜脈注射外泌體后,骨髓、脾臟中MDSCs的比例變化情況;以及荷瘤小鼠尾靜脈分別注射PBS、外泌體、外泌體+AMD3100（CXCR4抑制劑）、AMD3100后,每組腫瘤組織中MDSCs的比例變化。Transwell趨化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證以上4種方法處理MDSCs后的遷移能力。WB檢測(cè)外泌體共培養(yǎng)后MDSCs中CXCR4的表達(dá)情況。小鼠尾靜脈注射外泌體后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨髓、脾臟中MDSCs細(xì)胞群的CXCR4陽(yáng)性表達(dá)情況。WB檢測(cè)PBS、外泌體、外泌體+C29（TLR2抑制劑）、C29 4種方法處理MDSCs后,TLR2、p65、Pp65、CXCR4的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果電鏡及WB均表明提取物質(zhì)為外泌體。MDSCs在脾臟及腫瘤組織中的比例隨著荷瘤時(shí)間延長(zhǎng)而升高。小鼠尾靜脈注射外泌體后,MDSCs在骨髓、脾... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：31 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

外泌體表面標(biāo)志蛋白的鑒定和電鏡下觀察到的典型形態(tài)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文12圖2MDSCs比例隨荷瘤時(shí)間延長(zhǎng)而升高Figure2.ThepercentageofMDSCsinspleenandtumortissuewasincreasedalongwiththetumor-bearingtime.Micewereexecutedatthetimepointsof14days,21daysand28daysafterinjectedRM-1cells,thetumortissue(A,C)andspleen(B,C)weredissociatedtoinvestigatethepercentageofMDSCsbyflowcytometry.Spleeninnormalmiceasthecontrolgroup.*p<0.05,**p<0.01comparedwith14daysgroup.2.3外泌體可誘導(dǎo)MDSCs的擴(kuò)增和遷移，CXCR4抑制劑AMD3100可在體內(nèi)外抑制MDSCs的募集正常小鼠經(jīng)尾靜脈以每周3次的頻率連續(xù)注射外泌體2周，末次注射后1天取骨髓和脾臟，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD11b+Gr-1+MDSCs比例。結(jié)果顯示，注射外泌體的骨髓（Fig.3A,3B）和脾臟（Fig.3C,3D）中MDSCs的比例（分別為47.87%、9.96%）明顯高于PBS組（骨髓、脾臟組織分別為43.85%、2.76%）。在荷瘤小鼠模型中，外泌體處理后的MDSCs在腫瘤組織中比例為16.76%，與PBS組（比例為8.37%）相比具有明顯的募集作用。此外，外泌體加AMD3100組MDSCs的百分比為10.20%，明顯低于僅注射外泌體組(圖3E,3F)，提示外泌體誘導(dǎo)的MDSCs在體內(nèi)的遷移效應(yīng)可被AMD3100阻斷。采用Transwell趨化實(shí)驗(yàn)，將上室的MDSCs分為PBS、外泌體、外泌體+AMD3100和AMD3100處理組，在下室中加入CXCL12，共培養(yǎng)24H。結(jié)果顯示，與PBS組相比，外泌體組可誘導(dǎo)更多的MDSCs遷移到下室，外泌體+AMD3100組較單純外泌體組MDSCs的遷移效應(yīng)降低(圖3G,3H)，與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。上述結(jié)果表明，外泌體可誘導(dǎo)MDSCs的募集，而體內(nèi)和體外用AMD3100阻

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文13斷CXCL12/CXCR4信號(hào)軸后，均發(fā)現(xiàn)由外泌體誘導(dǎo)的MDSCs遷移效應(yīng)被明顯抑制。綜上所述，我們有理由認(rèn)為外泌體可以通過(guò)調(diào)節(jié)CXCR4的表達(dá)，在一定程度上影響MDSCs的募集。圖3外泌體能上調(diào)MDSCs的增殖和遷移能力Figure3.ExosomesinducedMDSCsexpansionandmigration.PercentageofMDSCsinBM(A,B)andspleen(C,D)wasexaminedbyflowcytometryafterinjectedexosomestonormalmice.(E,F)PercentageofMDSCsintumortissueof4treatmentgroupswasmeasuredbyflowcytometry.(G,H)ChemotaxiseffectofCXCL12toMDSCsfromBMofmiceaftertreatedwith4differentgroupsdetectedbytranswellchemotaxisassay.*p<0.05,**p<0.01comparedwithPBSgroup


本文編號(hào)：3034278