目的:1.評(píng)價(jià)Akt抑制劑MK-2206對(duì)常氧和缺氧環(huán)境下的人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖、侵襲的影響;2.對(duì)比在MK-2206作用下的常氧和缺氧環(huán)境中的SW480細(xì)胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA和蛋白表達(dá)水平的差異;3.初步闡明PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路與HIF-1α在調(diào)控結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞的增殖、侵襲的作用。方法:1.常規(guī)培養(yǎng)SW480細(xì)胞株,待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后分別使用0、100、200、250、300μmol/L的CoCl₂誘導(dǎo)細(xì)胞缺氧,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。結(jié)合參考文獻(xiàn)選取適宜濃度的CoCl₂來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),利用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性,得到SW480細(xì)胞缺氧模型組。2.在細(xì)胞中加入0、5、10、15、20μmol/L濃度的Akt抑制劑MK-2206處理24h、48h、72h,CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度下的MK-2206對(duì)細(xì)胞增殖的影響。3.選取能夠顯著抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的最小的MK-2206濃度,結(jié)合之前的CoCl₂濃度,然后將實(shí)驗(yàn)分成4個(gè)組:空白組,MK-2206組,缺氧（CoCl_2... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CoCl2作用24-72h時(shí)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞相對(duì)增殖率的影響

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉琦21顯差異(P＞0.05)，高于10μmol/L的組與對(duì)照組有顯著差異(P＜0.05)，同時(shí)在顯微鏡下觀察到MK-2206濃度越高，細(xì)胞的間距越大，懸浮細(xì)胞越多。而72h時(shí)，結(jié)果提示各濃度組增殖率明顯下降(P＜0.05)，且在鏡下可見大量懸浮細(xì)胞，詳見圖2。由此得知MK-2206具有一定的濃度和時(shí)間依賴性，且10μmol/L的MK-2206作用24h時(shí)已開始產(chǎn)生抑制效果，作用48h時(shí)抑制作用顯著，且細(xì)胞活性相對(duì)較好，故48h可作為檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，而10μmol/L的MK-2206可作為實(shí)驗(yàn)抑制濃度。圖2MK-2206作用24-72h時(shí)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞相對(duì)增殖率的影響Fig2TheeffectofMK-2206ontherelativeproliferationrateofcoloncancerSW480cellsat24-72h2.1.3MK-2206對(duì)不同氧環(huán)境下的SW480細(xì)胞侵襲及遷移的影響結(jié)合以上預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終我們選擇了200μmol/L的CoCl2、10μmol/L的MK-2206來處理細(xì)胞，選擇細(xì)胞活性相對(duì)較好的48h為檢測(cè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)。最后由四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，缺氧組比空白組的侵襲性明顯增加(P＜0.05)，同時(shí)也高于MK-2206+缺氧組(P＜0.05)；MK-2206組的侵襲性顯著降低(P＜0.05)，而MK-2206組和MK-2206+缺氧組的結(jié)果表明無明顯差異(P＞0.05)，如圖3A、表2、圖4A、B示。在遷移實(shí)驗(yàn)中，缺氧組無論是和空白組比較還是和MK-2206+缺氧組相比，其遷移數(shù)量均明顯增加(P＜0.05)，MK-2206組較空白組和MK-2206+缺氧組穿過transwell小室的細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P＜0.05)。詳見圖3B、表2、圖4C、D。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉琦22圖3各組鏡下結(jié)晶紫染色后Transwell小室侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果(×200）Fig3TheexperimentalresultsofTranswellchamberinvasionandmigrationaftermicroscopiccrystalvioletstainingineachgroup(×200）表2各組細(xì)胞侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)比較（×200）Tab2Thecomparisonofcellinvasionandmigrationexperimentsineachgroup（×200）空白組aMK-2206b缺氧組cMK-2206+缺氧d侵襲細(xì)胞數(shù)(個(gè))p1p2125.00±6.5671.67±14.360.0010.255183.67±14.010.0010.00084.67±15.14遷移細(xì)胞數(shù)(個(gè))p1p2160.67±14.7498.00±6.000.0010.003258.67±20.600.0000.000144.00±8.54注：p1是以a為對(duì)照組時(shí)b、c組p值，p2是以d為對(duì)照時(shí)b、c組p值。BA

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]缺氧誘導(dǎo)因子1-α參與結(jié)直腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及DNA同源重組修復(fù)的機(jī)制[J]. 唐康,程勇,龐云,伍鑫,張百川,王五藝.  中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2016(06)
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碩士論文
[1]牛磺酸對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡與自噬的影響[D]. 舒婷.南昌大學(xué) 2017



本文編號(hào)：2989743