發(fā)布時間：2021-01-08 04:23

　　本研究報道了一個具有抗微管聚合活性的杜鵑素衍生物6,8-二甲基-7,4’-二甲氧基-5-羥基甲烷（HDF）。而杜鵑素作為止咳祛痰藥物并沒有展現(xiàn)出微管靶向的生物活性。通過細(xì)胞生物學(xué)實驗,驗證了HDF具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、影響細(xì)胞形態(tài)、抑制細(xì)胞遷移、阻滯細(xì)胞周期以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的生物活性。通過顯微成像技術(shù)、生物化學(xué)和生物物理學(xué)手段,證實HDF能夠抑制微管組裝從而擾亂細(xì)胞內(nèi)微管的排布。材料方法:以人急性早幼粒白血病細(xì)胞系HL-60、人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和人宮頸癌細(xì)胞系HeLa細(xì)胞為模型,以及從豬腦中分離提取微管蛋白,進行了一系列細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和生物物理學(xué)實驗。（1）應(yīng)用MTT比色法測定了HDF對細(xì)胞增殖的影響。（2）用劃痕遷移法測定HDF對A549和HeLa這兩種貼壁細(xì)胞遷移能力的影響。（3）用流式細(xì)胞術(shù)檢測了HDF對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡水平的影響。（4）用免疫熒光成像展現(xiàn)了HDF對細(xì)胞內(nèi)微管空間定位的影響。（5）通過微管體外組裝實驗和對細(xì)胞內(nèi)蛋白提取物免疫印跡分析,判斷出HDF對微管組裝的影響。（6）用等溫滴定量熱技術(shù)鑒定α/β-微管蛋白異二聚體與HDF是否存在直接相互作用。結(jié)果:（1... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

α/β-微管蛋白上已知的六個結(jié)合位點

106,109]、抗微生物(抗細(xì)菌[110-112]、抗真菌[112,113]和抗病毒[112,113])、抗癌[106,114]和止瀉[115]等活性而被廣泛研究。近年來，隨著對其構(gòu)效關(guān)系的深入研究，越來越多黃酮類化合物作為靶向藥物的潛能被發(fā)現(xiàn)[116]。1.3.2黃酮類化合物的理化特征與生物活性從廣義上講，黃酮類化合物泛指兩個苯環(huán)通過中央三碳鏈相互連結(jié)而形成的一系列C6-C3-C6化合物的總稱[117]。根據(jù)國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IUPAC)的定義，黃酮類化合物可以被分為：1)flavonoidsorbioflavonoids2)isoflavonoids3)neoflavonoids圖1-2黃酮類化合物的15-碳基礎(chǔ)分子結(jié)構(gòu)。Figure1-2.Molecularstructureofthe15-carbonskeleton.以上三種黃酮類化合物都具有15個碳原子骨架的一般結(jié)構(gòu)，該骨架由兩個苯環(huán)(A環(huán)和B環(huán))和一個雜環(huán)(C環(huán))組成(圖1-2)。大量的流行病學(xué)研究表明，藥用類黃酮化合物的消耗與各類疾病的發(fā)展呈負(fù)

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文專利化合物HDF的體外抗腫瘤活性和機制研究10第二章實驗材料和方法2.1實驗材料2.1.1化合物6，8-二甲基-7，4"-二甲氧基-5-羥基甲烷(HDF)經(jīng)杜鵑素修飾得到(圖2-1)。杜鵑素與1.5當(dāng)量的(CH3)2SO4/K2CO3在丙酮中得到鵑花醇(化合物1)(a)；鵑花醇加入醋酸酐溶液沖，冰浴條件下滴加濃硫酸，經(jīng)淬滅、萃娶洗滌、干燥、過濾以及濃縮，得到白色晶體化合物2(b)；將化合物2溶解在四氫呋喃(THF)/H2O的溶液中，冰浴條件下加入NaBH4、攪拌，后經(jīng)淬滅、萃娶干燥、過濾、濃縮，得到白色晶體HDF(c)。HDF粉末保存在-20℃條件下供后續(xù)實驗使用。圖2-1HDF由杜鵑素經(jīng)3步修飾得到。試劑和條件：(a)(CH3)2SO4，丙酮，K2CO3，回流，75.9%;(b)Ac2O，H2SO4，0°C，94.24%；(c)NaBH4，THF/H2O，0°C，62.85%。Figure2-1.FarrerolwasmodifiedtoaffordtheHDFaccordingtothreesteps.Reagentandconditions:(a)(CH3)2SO4,acetone,K2CO3,reflux,75.9%;(b)Ac2O,H2SO4,0°C,94.24%;(c)NaBH4,THF/H2O,0°C,62.85%.2.1.2細(xì)胞系人早幼粒髓性白血病細(xì)胞系HL-60、人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和人宮頸癌細(xì)胞系HeLa均購于上海細(xì)胞庫保存中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection,CCTCC)。2.1.3富含微管結(jié)合蛋白的微管蛋白溶液的制備


本文編號：2963902