目的收集并純化間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的微顆粒（MSC-MPs）,觀察其對(duì)過(guò)氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,并初步研究其機(jī)制。方法使用全骨髓貼壁法分離純化MSCs,運(yùn)用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、流式細(xì)胞術(shù)鑒定表面抗原、細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線以及誘導(dǎo)MSCs成骨和成脂分化四種方法來(lái)對(duì)MSCs進(jìn)行鑒定。使用無(wú)血清培養(yǎng)基處理第5代MSCs 48 h,收集上清液后梯度離心獲取MSCMPs。利用BCA法檢測(cè)MSC-MPs的蛋白含量,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSC-MPs的大小、數(shù)量和表面抗原。使用80μmol·L-1的H2O2處理細(xì)胞3 h,誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型,研究24和48μg·ml-1的MSC-MPs預(yù)處理H9C2心肌細(xì)胞24 h以后,其對(duì)細(xì)胞存活率、細(xì)胞釋放的乳酸脫氫酶等指標(biāo)的影響,包括:使用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率,使用檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)細(xì)胞中的MDA、SOD、GSH-Px以及細(xì)胞LDH釋放量,運(yùn)用JC-1檢測(cè)試劑盒和ROS檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ROS相對(duì)含量和線粒體膜電位水平,使用Caspase-3檢測(cè)試劑盒和Caspase-9檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞中Caspase-3... 

【文章來(lái)源】： 馬瑞君 山西醫(yī)科大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞釋放微顆粒示意圖

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文112結(jié)果2.1MSCs的形態(tài)學(xué)特征從大鼠股骨和脛骨內(nèi)提取的第0代MSCs大小和形態(tài)各異，但是第0代細(xì)胞經(jīng)過(guò)10d左右的換液后較小的紅細(xì)胞和其他血細(xì)胞的數(shù)量逐漸減少，MSCs呈現(xiàn)出典型的“紡錘樣”和“魚群狀”排列，MSCs在首次傳代后生長(zhǎng)速度顯著增快，6d左右即可達(dá)到融合率90％左右，MSCs培養(yǎng)到第2代時(shí)雜細(xì)胞含量較少，即獲得到高純度的MSCs。圖2-1大鼠MSCs的形態(tài)學(xué)特征A：分離24h后的MSCs；B：48h后首次換液時(shí)的MSCs；C：第1代MSCs；D：第2代的MSCs；E：第3代的MSCs；F：第6代的MSCs。2.2MSCs的生長(zhǎng)曲線使用第5代MSCs進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，生長(zhǎng)曲線呈“S”型，MSCs在接種后的24h內(nèi)生長(zhǎng)速度緩慢，在第2天到第7天生長(zhǎng)速度顯著增快，呈指數(shù)速度生長(zhǎng)，在第7天，細(xì)胞數(shù)量接近飽和，生長(zhǎng)速度顯著降低，到達(dá)平臺(tái)期。

第5代MSCs細(xì)胞生長(zhǎng)曲線


本文編號(hào)：2963812