目的:課題組前期研究發(fā)現(xiàn)堿性成纖維細胞因子（Basic fibroblast growth factor,b FGF）可調(diào)控根尖牙乳頭干細胞（Stem cells from the apical papilla,SCAP）成骨/成牙本質(zhì)分化,維持SCAP分化潛能,Wnt/β-catenin信號通路和p38信號通路參與了該過程并存在相互串擾。本實驗在前期研究基礎(chǔ)上,通過轉(zhuǎn)錄組測序進一步分析b FGF在調(diào)控SCAP成骨分化中的分子機制,為SCAP的進一步研究和臨床應用提供理論實驗基礎(chǔ)。方法:1、采用酶消化法獲得人原代SCAP,通過有限稀釋法、克隆化傳代培養(yǎng)SCAP,免疫熒光染色檢測間充質(zhì)干細胞標志物,并通過成骨成脂分化誘導進行多向分化能力鑒定。2、將第三代SCAP細胞分為兩組:實驗組（20ng/m L b FGF+成骨誘導液）,對照組（成骨誘導液）,分別誘導7天和14天,每組3個生物學重復,收集各樣本的總RNA。RNA質(zhì)檢、構(gòu)建c DNA文庫、Hi Seq測序,構(gòu)建SCAP的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫。質(zhì)檢數(shù)據(jù)庫、比對基因組、基因表達水平和差異表達分析,篩選差異表達基因。以差異表達基因為對象,進一步進行... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建的程序圖

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文孫麗英16分開來，其中能定位到基因組上的reads數(shù)量總樣本量(Totalmapped)應大于60-70%。此部分由杭州聯(lián)川生物公司提供技術(shù)支持。數(shù)據(jù)達到質(zhì)控的要求，將被用于之后一系列數(shù)據(jù)的分析（圖2）：圖1轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建的程序圖Fig.1Theprocedurediagramfortranscriptomelibraryconstruction圖2轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析流程圖Fig.2WorkflowsforRNA-seqdataanalysis

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文孫麗英201.4統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)錄入SPSS23.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差（X±s）來表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊采用Least-SignificantDifference(LSD)檢驗進行分析，方差不齊采用Dunnett`sT3法進行分析，以ɑ=0.05為檢驗水準，P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。2.結(jié)果2.1SCAP的獲取與來源鑒定牙根未發(fā)育完成的離體健康的根尖牙乳頭組織呈粉色，位于根尖未發(fā)育完成的根尖部，為質(zhì)地韌的纖維結(jié)締組織，易剝離；有些牙根發(fā)育不足1/2時，其根尖乳頭組織多而韌（圖3A,B）。本實驗采用I型膠原酶解組織塊法提取原代根尖牙乳頭細胞，3天左右在顯微鏡下觀察到單個貼壁細胞，細胞體豐滿，體積較小，核位于中央，呈成纖維細胞樣細胞。有時見方形、橢圓形及多角形的細胞，細胞呈巢狀或集落狀生長（圖3C,D）。圖3根尖牙乳頭干細胞的原代培養(yǎng)A,B.體外完整磨牙根尖牙乳頭組織；C,D.SCAP原代細胞分別培養(yǎng)3天和7天呈巢狀生長及生長匯合至90%(C×100；D×200)Fig.3PrimarycultureofstemcellsfromtheapicalpapillaA,BInvitrocompletemolarapicaltoothpapillatissue;C,DTheprimarycellsofSCAPshowednestgrowthat3daysand7daysrespectively,andthegrowthconfluencereached90%(C×100;D×200)原代SCAP細胞通過酶消化后記數(shù)于96孔板中，隔1天顯微鏡下觀察單個貼壁

【參考文獻】：
期刊論文
[1]牙髓干細胞干性維持的影響因素[J]. 左燕琴,于金華,閆明.  口腔生物醫(yī)學. 2017(04)
[2]bFGF激活PI3K信號通路調(diào)控大鼠胚胎干細胞自我更新[J]. 林敏,李平,錢其軍.  中國細胞生物學學報. 2016(05)
[3]間充質(zhì)干細胞干性維持信號通路的研究進展[J]. 周穎,高孟飛,朱慧勇.  吉林大學學報(醫(yī)學版). 2013(03)
[4]NFκB信號通路在炎癥根尖牙乳頭干細胞中的作用[J]. 杜鵑,杜娟,范志朋.  北京口腔醫(yī)學. 2013(01)

博士論文
[1]堿性成纖維細胞因子對根尖牙乳頭干細胞生物學作用及機制研究[D]. 吳家媛.第四軍醫(yī)大學 2011

碩士論文
[1]Wnt/β-catenin信號通路和p38信號通路對bFGF維持人根尖牙乳頭干細胞干性的影響[D]. 何梅.遵義醫(yī)科大學 2019
[2]體外研究DKK1在牙囊細胞的表達及在成骨分化的作用機制[D]. 顏露.新疆醫(yī)科大學 2019
[3]骨膜素對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞遷移、侵襲、粘附的調(diào)控及其機制研究[D]. 徐曉璇.山東大學 2015



本文編號：2932248