本文選題：盆腔器官脫垂　切入點(diǎn)：Wnt/β-catenin信號(hào)通路　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1研究盆腔器官脫垂患者骶韌帶組織中CollagenI、Wnt/β-catenin信號(hào)通路的表達(dá)。2研究機(jī)械力對(duì)原代培養(yǎng)的骶韌帶成纖維細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路及分泌CollagenI能力的影響。3研究機(jī)械力對(duì)成纖維細(xì)胞分泌MMP-1的影響。4從信號(hào)通路水平研究機(jī)械力在盆腔器官脫垂發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:1研究對(duì)象選取2016年6月-2016年9月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院東院婦二科因盆腔器官脫垂(Pelvic organ proplase,POP)行手術(shù)治療患者的骶韌帶為病變組,同期因子宮良性病變行腹腔鏡下全子宮切除術(shù)患者的骶韌帶組織為對(duì)照組。兩組患者均無(wú)子宮內(nèi)膜異位癥、慢性阻塞性肺氣腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等與結(jié)締組織相關(guān)的疾病,術(shù)前3個(gè)月內(nèi)均未使用過(guò)性激素治療。病例組及對(duì)照組在年齡、孕產(chǎn)次、體重指數(shù)等方面比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)(Table 1)。2取材所有患者簽署知情同意書(shū)。所取標(biāo)本由一位副主任及以上級(jí)別的醫(yī)師在腹腔鏡下取得近宮頸部分的骶韌帶組織,其中非POP患者的骶韌帶組織一部分至于無(wú)血清的DMEM高糖無(wú)菌培養(yǎng)基內(nèi),4°C冰盒送往實(shí)驗(yàn)室,進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng),且整個(gè)取材及運(yùn)輸過(guò)程小于1小時(shí)并要求嚴(yán)格無(wú)菌;一部分至于4%福爾馬林固定液內(nèi),用于包埋、切片,還有一部分置于標(biāo)本袋內(nèi)于-80°C保存,用于組織蛋白的提取。POP患者的骶韌帶組織一部分置于4%福爾馬林固定液內(nèi),用于包埋、切片,另一部分置于標(biāo)本袋內(nèi)于-80°C保存,用于組織蛋白的提取。3免疫組織化學(xué)采用SP三步法對(duì)切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,觀察病例組與對(duì)照組中wnt16、β-catenin、collageni的表達(dá)。4通過(guò)westernblot檢測(cè)pop組與非pop組骶韌帶組織中wnt16、β-catenin、collageni的表達(dá)水平,所得數(shù)據(jù)采用spassibm21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,p0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)與鑒定采用組織塊法進(jìn)行骶韌帶成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng),通過(guò)倒置相差顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行細(xì)胞鑒定。6細(xì)胞力學(xué)實(shí)驗(yàn)采用flexcercell4000柔性基底拉伸加載系統(tǒng)對(duì)第3-5代處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的骶韌帶成纖維細(xì)胞進(jìn)行加力,整個(gè)加載過(guò)程在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行。加載參數(shù):幅度15%,正弦波,0.5hz,加載時(shí)間分別為:0、6、12小時(shí),在激光共聚焦顯微鏡下觀察機(jī)械力加載后成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,同時(shí)采用westernblot檢測(cè)受力前后成纖維細(xì)胞中wnt16、β-catenin、collageni表達(dá)含量的變化。所得數(shù)據(jù)采用spassibm21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,p0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7采用elisa實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)機(jī)械力加載對(duì)成纖維細(xì)胞分泌mmp-1的影響,所得數(shù)據(jù)采用spassibm21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,p0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示在病例組骶韌帶組織中wnt16、β-catenin、collageni的表達(dá)較對(duì)照組均有明顯的下降趨勢(shì)。2通過(guò)westernblot檢測(cè)組織蛋白中wnt16、β-catenin、collageni的表達(dá),發(fā)現(xiàn)病例組中三者的表達(dá)水平較對(duì)照組均降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3原代培養(yǎng)第5天,組織塊周圍可見(jiàn)少量細(xì)胞爬出,細(xì)胞形態(tài)各異,但以梭形細(xì)胞為主;第10天,組織塊周圍爬出的細(xì)胞明顯增多,呈放射狀圍繞于組織塊周圍,且以梭形細(xì)胞為主,亦可見(jiàn)三角形及多角形細(xì)胞;第20天,細(xì)胞較前增多且密集,絕大多數(shù)為梭形細(xì)胞,形態(tài)規(guī)則,但無(wú)明顯的排列方向。免疫細(xì)胞化學(xué)染色,波形蛋白(vimentin)陽(yáng)性,胞漿呈棕黃色,胞核呈藍(lán)色,角蛋白(cytokeratin)和平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-sma)染色陰性,提示為成纖維細(xì)胞。4在機(jī)械力作用下骶韌帶成纖維細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)方向發(fā)生變化,拉伸前,細(xì)胞呈多角形及梭形,無(wú)明顯的排列方向,拉伸后,細(xì)胞細(xì)長(zhǎng),呈長(zhǎng)梭形,生長(zhǎng)方向一致,與最大應(yīng)力方向垂直,且細(xì)胞間隙增大。5 Western blot結(jié)果顯示在機(jī)械力加載6小時(shí)后Wnt16、β-catenin、CollagenI的表達(dá)量明顯降低,且與0小時(shí)相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,當(dāng)機(jī)械力加載12小時(shí),三者的表達(dá)量均升高,但與0小時(shí)相比仍表現(xiàn)為下降趨勢(shì),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三者的升高與降低呈正相關(guān)。6 Elisa結(jié)果顯示機(jī)械力加載成纖維細(xì)胞6、12h后,成纖維細(xì)胞分泌MMP-1的量明顯增加,且與未加力培養(yǎng)6、12h的成纖維細(xì)胞分泌的MMP-1的量相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。機(jī)械力加載后成纖維細(xì)胞分泌MMP-1的速度明顯加快。結(jié)論:1 Wnt/β-catenin信號(hào)通路受抑制可能參與POP的發(fā)生、發(fā)展。2 Wnt/β-catenin信號(hào)通路能夠調(diào)控成纖維細(xì)胞分泌CollagenI的能力。3一定程度的機(jī)械力能夠抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路,其抑制程度可能與機(jī)械力作用時(shí)間有關(guān)。4一定程度的機(jī)械力能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞對(duì)MMP-1的分泌。
[Abstract]:Objective : To study the effects of mechanical force on the expression of Wnt / 尾 - catenin signaling pathway and the ability to secrete MMP - 1 in the sacral ligaments of patients with pelvic organ prolapse . The expression level of wnt16 , 尾 - catenin and bcl geni in cultured fibroblasts was significantly lower than that in the control group .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R711.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1712289