本文選題：自噬　切入點：中醫(yī)藥　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究調(diào)脂顆粒對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)在細胞、蛋白質(zhì)、分子水平自噬的影響,從而探討調(diào)脂顆�？箘用}粥硬化的作用機制。方法:運用血清藥理學(xué)方法,以調(diào)脂顆粒含藥血清處理生理狀態(tài)及病理狀態(tài)(過度自噬狀態(tài))下的內(nèi)皮細胞。通過MTT比色法檢測調(diào)脂顆粒含藥血清對內(nèi)皮細胞生長的影響。Westernblot檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的相對表達量變化,免疫熒光法檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬小體的數(shù)目變化,SYBRGreenⅠ實時熒光定量PCR檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬相關(guān)基因mTOR、ATG5、ATG7、Beclin-1的相對表達量變化。結(jié)果:調(diào)脂顆粒含藥血清處理內(nèi)皮細胞后,較空白組,細胞活力無明顯改變,自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對表達上調(diào),LC3自噬小體數(shù)量增加(p0.05),Beclinl在分子及蛋白層面表達均無明顯差異(p0.05)。雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)處理內(nèi)皮細胞后,較空白組比較自噬相關(guān)蛋白及相關(guān)基因表達上調(diào)。調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理HUVEC后,細胞活力無明顯改變,較雷帕霉素單獨處理比較,自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對表達顯著下降,LC3自噬小體數(shù)量明顯減少(p0.05或p0.01),各自噬相關(guān)基因表達均上調(diào),Beclin-1在分子及蛋白層面表達均無明顯差異(p0.05)。3MA(6-氨基-3-甲基嘌呤,3-Metllyladenine)聯(lián)合雷帕霉素組與雷帕霉素組在各蛋白及分子水平存在明顯差異(p0.05),但與各濃度調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理組無明顯差異(p0.05)。結(jié)論:在蛋白及分子水平層面,調(diào)脂顆粒上調(diào)生理狀態(tài)下內(nèi)皮細胞自噬,抑制病理狀態(tài)下內(nèi)皮細胞自噬,驗證了調(diào)脂顆�？纱龠M內(nèi)皮細胞適度自噬,抑制內(nèi)皮細胞過度自噬,這可能是其抗動脈粥樣硬化的作用機制之一。各調(diào)脂顆粒藥物組與相關(guān)對照組的LC3表達存在差異,而Beclinl的表達無明顯差異,這說明調(diào)脂顆粒通過調(diào)控與LC3合成相關(guān)的信號通路從而調(diào)控內(nèi)皮細胞自噬。
[Abstract]:Aim: to study the effect of Tiaozhi granules on autophagy of human umbilical vascular endothelial cells in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) at cell, protein and molecular levels, and to explore the mechanism of Tiaozhi granule in preventing atherosclerosis.Methods: serum pharmacological method was used to treat endothelial cells in physiological and pathological state (hyperautophagy) with Tiaozhi granule.The effect of Tiaozhi granule serum on the growth of endothelial cells was detected by MTT colorimetry. Western blot was used to detect the relative expression of autophagy associated protein LC3- 鈪，

本文編號：1711768