本文關(guān)鍵詞：腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在多柔比星誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡中的作用研究　出處：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景和目的乳腺癌在世界范圍內(nèi)發(fā)病率都非常高,是危害女性健康的主要腫瘤,在發(fā)病率相對(duì)較低的我國(guó)近年來(lái)乳腺癌的發(fā)病率和死亡率也急劇增加,影響婦女及家庭的生活質(zhì)量,加重家庭及國(guó)家負(fù)擔(dān)。由于乳腺癌生長(zhǎng)迅速,目前化療是主要治療手段之一。多柔比星(Doxorubicin,DOX)是二十世紀(jì)七十年代從波賽鏈霉菌變種鏈霉菌的發(fā)酵液中提取的一種糖苷抗腫瘤抗生素,可抑制核苷酸的合成,屬于周期非特異性藥物,其對(duì)多種腫瘤均有殺滅作用。DOX擁有非常好的抗腫瘤活性和獨(dú)特的抗腫瘤機(jī)理,被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、肉瘤和兒科腫瘤的治療,但是由于對(duì)心肌細(xì)胞具有毒害作用使得它在臨床中的使用受到很大的限制,多與其他抗腫瘤藥物聯(lián)用。DOX的抗腫瘤作用機(jī)制至今未完全闡明,有研究進(jìn)一步明確其作用的分子機(jī)制。我們團(tuán)隊(duì)一直注重腺苷酸活化蛋白激酶(5'-AMP activated protein kinase,AMPK)對(duì)癌細(xì)胞的抑制能力,經(jīng)過(guò)許多個(gè)實(shí)驗(yàn)報(bào)道,活化AMPK激活許多下游的信號(hào)通路蛋白,在藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的死亡中起到非常關(guān)鍵的作用。本論文旨在探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在多柔比星誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡中的作用。研究方法和材料1、使用10%胎牛血清(FBS)與抗生素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)MCF-7乳腺癌細(xì)胞,并在37℃含有5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的癌細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。分別用AMPK激活劑AICAR、si RNA敲低AMPK表達(dá)、AMPK抑制劑復(fù)合物C聯(lián)合多柔II比星對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行處理,通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)AMPK、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、P38蛋白的表達(dá)量,MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率間接反應(yīng)細(xì)胞增殖,檢測(cè)AMPK si RNA在多柔比星誘導(dǎo)的抑制癌細(xì)胞克隆形成中的作用,細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AMPK si RNA在多柔比星誘導(dǎo)的癌細(xì)胞凋亡中的作用,檢測(cè)AMPK si RNA在抑制多柔比星誘導(dǎo)的癌細(xì)胞ROS生成中的作用。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。其中對(duì)計(jì)量資料條用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)來(lái)表示,并利用單因素方差分析(One-way ANOVA)對(duì)分組計(jì)量資料進(jìn)行顯著性分析,各實(shí)驗(yàn)組間的兩兩比較用單因素方差分析,同時(shí)計(jì)算p值。統(tǒng)計(jì)水準(zhǔn)p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果1、多柔比星可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞AMPK的活化,AICAR單獨(dú)或聯(lián)合多柔比星可誘導(dǎo)AMPK的激活及增加DOX對(duì)MCF-7細(xì)胞抑制率[AICAR+DOX組(17.7±1.6%)與DOX組(58.4±1.8%)的細(xì)胞存活率比較,P0.001];復(fù)合物C或si RNA敲低AMPK表達(dá)聯(lián)合多柔比星后,P-AMPK及P-ACC表達(dá)明顯下降,p38活化水平不受影響,MCF-7細(xì)胞增殖抑制率下降[AMPKi+DOX組(72.7±1.8%)與DOX組(48.3±1.7%)的細(xì)胞存活率比較,P0.001;AMPK si RNA+DOX組(76.9±2.2%)與錯(cuò)義si RNA+DOX組(96.9±1.8%)比較,P0.001]。AMPK si RNA抑制多柔比星誘導(dǎo)的抑制癌細(xì)胞克隆形成作用;AMPK si RNA抑制多柔比星誘導(dǎo)的癌細(xì)胞凋亡;AMPK si RNA抑制多柔比星誘導(dǎo)的癌細(xì)胞ROS生成。2、在MCF-7細(xì)胞中加入多柔比星之后,AMPKα和ACC磷酸化水平隨著DOX的加入的時(shí)間延長(zhǎng)而上升,DOX活化AMPK信號(hào)通路下游ACC及P38的活化;DOX聯(lián)合AMPK激活劑AICAR處理MCF-7細(xì)胞,與單用AICAR相比,P-AMPK、P-ACC表達(dá)明顯增多。我們又利用AMPKαsi RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)Eca-109細(xì)胞株,沉默AMPK基因,或用AMPK抑制劑compound C抑制AMPK表達(dá),再予以DOX藥物處理后,AMPK活化程度減弱,AMPK-RNAi和AMPK抑制劑compound C能夠拮抗DOX激活的AMPK的信號(hào)表達(dá)。結(jié)論在體外培養(yǎng)的MCF-7乳腺癌細(xì)胞中,AMPK介導(dǎo)DOX誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,可能是通過(guò)活化其下游ACC及P38信號(hào)通路,另外也誘導(dǎo)ROS生成,激活caspase-3,最終引起癌細(xì)胞死亡。
[Abstract]:Anti - tumor effects of AMP activated protein kinase ( AMPK ) in breast cancer , lung cancer , bladder cancer , gastric cancer , ovarian cancer , Hodgkin ' s lymphoma , non - Hodgkin ' s lymphoma , multiple myeloma , sarcoma and pediatric tumors . The expression of AMPK and P - ACC in MCF - 7 cells was significantly decreased .

【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1381891