本文關(guān)鍵詞：腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在多柔比星誘導乳腺癌MCF-7細胞凋亡中的作用研究　出處：《江蘇大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究背景和目的乳腺癌在世界范圍內(nèi)發(fā)病率都非常高,是危害女性健康的主要腫瘤,在發(fā)病率相對較低的我國近年來乳腺癌的發(fā)病率和死亡率也急劇增加,影響婦女及家庭的生活質(zhì)量,加重家庭及國家負擔。由于乳腺癌生長迅速,目前化療是主要治療手段之一。多柔比星(Doxorubicin,DOX)是二十世紀七十年代從波賽鏈霉菌變種鏈霉菌的發(fā)酵液中提取的一種糖苷抗腫瘤抗生素,可抑制核苷酸的合成,屬于周期非特異性藥物,其對多種腫瘤均有殺滅作用。DOX擁有非常好的抗腫瘤活性和獨特的抗腫瘤機理,被廣泛應用于乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、肉瘤和兒科腫瘤的治療,但是由于對心肌細胞具有毒害作用使得它在臨床中的使用受到很大的限制,多與其他抗腫瘤藥物聯(lián)用。DOX的抗腫瘤作用機制至今未完全闡明,有研究進一步明確其作用的分子機制。我們團隊一直注重腺苷酸活化蛋白激酶(5'-AMP activated protein kinase,AMPK)對癌細胞的抑制能力,經(jīng)過許多個實驗報道,活化AMPK激活許多下游的信號通路蛋白,在藥物誘導腫瘤細胞的死亡中起到非常關(guān)鍵的作用。本論文旨在探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在多柔比星誘導乳腺癌MCF-7細胞凋亡中的作用。研究方法和材料1、使用10%胎牛血清(FBS)與抗生素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)MCF-7乳腺癌細胞,并在37℃含有5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),取對數(shù)生長期的癌細胞用于實驗。分別用AMPK激活劑AICAR、si RNA敲低AMPK表達、AMPK抑制劑復合物C聯(lián)合多柔II比星對MCF-7乳腺癌細胞進行處理,通過Western Blot方法檢測不同時間點AMPK、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、P38蛋白的表達量,MTT檢測細胞存活率間接反應細胞增殖,檢測AMPK si RNA在多柔比星誘導的抑制癌細胞克隆形成中的作用,細胞流式實驗檢測AMPK si RNA在多柔比星誘導的癌細胞凋亡中的作用,檢測AMPK si RNA在抑制多柔比星誘導的癌細胞ROS生成中的作用。統(tǒng)計學處理使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗中的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。其中對計量資料條用均數(shù)±標準差(x±s)來表示,并利用單因素方差分析(One-way ANOVA)對分組計量資料進行顯著性分析,各實驗組間的兩兩比較用單因素方差分析,同時計算p值。統(tǒng)計水準p0.05有統(tǒng)計學意義。研究結(jié)果1、多柔比星可誘導MCF-7細胞AMPK的活化,AICAR單獨或聯(lián)合多柔比星可誘導AMPK的激活及增加DOX對MCF-7細胞抑制率[AICAR+DOX組(17.7±1.6%)與DOX組(58.4±1.8%)的細胞存活率比較,P0.001];復合物C或si RNA敲低AMPK表達聯(lián)合多柔比星后,P-AMPK及P-ACC表達明顯下降,p38活化水平不受影響,MCF-7細胞增殖抑制率下降[AMPKi+DOX組(72.7±1.8%)與DOX組(48.3±1.7%)的細胞存活率比較,P0.001;AMPK si RNA+DOX組(76.9±2.2%)與錯義si RNA+DOX組(96.9±1.8%)比較,P0.001]。AMPK si RNA抑制多柔比星誘導的抑制癌細胞克隆形成作用;AMPK si RNA抑制多柔比星誘導的癌細胞凋亡;AMPK si RNA抑制多柔比星誘導的癌細胞ROS生成。2、在MCF-7細胞中加入多柔比星之后,AMPKα和ACC磷酸化水平隨著DOX的加入的時間延長而上升,DOX活化AMPK信號通路下游ACC及P38的活化;DOX聯(lián)合AMPK激活劑AICAR處理MCF-7細胞,與單用AICAR相比,P-AMPK、P-ACC表達明顯增多。我們又利用AMPKαsi RNA穩(wěn)轉(zhuǎn)Eca-109細胞株,沉默AMPK基因,或用AMPK抑制劑compound C抑制AMPK表達,再予以DOX藥物處理后,AMPK活化程度減弱,AMPK-RNAi和AMPK抑制劑compound C能夠拮抗DOX激活的AMPK的信號表達。結(jié)論在體外培養(yǎng)的MCF-7乳腺癌細胞中,AMPK介導DOX誘導的細胞凋亡,可能是通過活化其下游ACC及P38信號通路,另外也誘導ROS生成,激活caspase-3,最終引起癌細胞死亡。
[Abstract]:Anti - tumor effects of AMP activated protein kinase ( AMPK ) in breast cancer , lung cancer , bladder cancer , gastric cancer , ovarian cancer , Hodgkin ' s lymphoma , non - Hodgkin ' s lymphoma , multiple myeloma , sarcoma and pediatric tumors . The expression of AMPK and P - ACC in MCF - 7 cells was significantly decreased .

【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：1381891