西他列汀是由美國(guó)默克公司研制開(kāi)發(fā)的治療Ⅱ型糖尿病的新型降糖藥物。(S)-3-羥基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯[(S)-HTB]是催化合成西他列汀的關(guān)鍵中間體。本文選擇醛酮還原酶(aldo-keto reductases,AKR)與葡萄糖脫氫酶(glucose dehydrogenase,GDH)的重組全細(xì)胞用于不對(duì)稱還原底物3-氧代-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯(OTB)。三種AKR-GDH重組全細(xì)胞在不對(duì)稱合成HTB的過(guò)程中展示出了不同的催化性能。ytbE-GDH全細(xì)胞催化底物OTB時(shí)主要生成(R)-HTB,iolS-GDH和yhdN-GDH重組全細(xì)胞催化OTB時(shí),產(chǎn)物HTB則主要為(S)-HTB。選擇了在不對(duì)稱合成(S)-HTB的過(guò)程中展示出最好的催化效果的yhdN-GDH重組全細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行研究。優(yōu)化了yhdN-GDH全細(xì)胞不對(duì)稱催化合成(S)-HTB時(shí)所涉及的反應(yīng)條件。yhdN-GDH全細(xì)胞在最適條件下合成(S)-HTB反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率以及對(duì)映體過(guò)量值(e.e._p)分別為24.9%和85.8%。為進(jìn)一步提高yhdN-GDH重組全細(xì)胞催化合成(S...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
第一章 緒論
    1.1 氧化還原酶
        1.1.1 氧化還原酶的簡(jiǎn)介
        1.1.2 輔因子再生
        1.1.3 酶法實(shí)現(xiàn)輔因子再生
    1.2 醛酮還原酶
        1.2.1 醛酮還原酶
        1.2.2 醛酮還原酶催化的不對(duì)稱還原反應(yīng)
    1.3 烯鍵還原酶
        1.3.1 烯鍵還原酶
        1.3.2 烯鍵還原酶催化的還原反應(yīng)
        1.3.3 烯鍵還原酶的催化多功能性
    1.4 本論文的研究思想
第二章 醛酮還原酶催化的立體選擇性還原反應(yīng)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌種
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要溶液配制
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 合成(R,S)-HTB標(biāo)準(zhǔn)品
        2.3.2 AKR-GDH重組全細(xì)胞的獲取
        2.3.3 AKR-GDH全細(xì)胞催化制備(S)-HTB
        2.3.4 深共融溶劑(DES)的制備
        2.3.5 分子對(duì)接
        2.3.6 yhdN突變體與GDH重組全細(xì)胞催化制備(S)-HTB
        2.3.7 反應(yīng)轉(zhuǎn)化率及立體選擇性的檢測(cè)方法
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 (R,S)-HTB標(biāo)準(zhǔn)品的合成
        2.4.2 AKR-GDH全細(xì)胞催化制備(S)-HTB
        2.4.3 yhdN-GDH全細(xì)胞催化反應(yīng)的參數(shù)優(yōu)化
        2.4.4 不同添加劑對(duì)yhdN-GDH全細(xì)胞催化此反應(yīng)的影響
        2.4.5 分子對(duì)接
        2.4.6 yhdN突變體與GDH重組全細(xì)胞催化制備(S)-HTB
        2.4.7 yhdN和yhdN_L278G對(duì)接結(jié)果對(duì)比
    2.5 小結(jié)
第三章 烯鍵還原酶催化的脫氯反應(yīng)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要溶液配制
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 3 ,4’-二氯苯丙酮的合成
        3.3.2 合成1-(4-氯-苯基)丙烯酮
        3.3.3 ER的表達(dá)
        3.3.4 ER的純化
        3.3.5 ER濃度測(cè)定
        3.3.6 ER酶催化3,4’-二氯苯丙酮制備4’-氯苯丙酮
        3.3.7 ER酶催化1-(4-氯-苯基)丙烯酮
        3.3.8 反應(yīng)轉(zhuǎn)化率的檢測(cè)方法
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 3 ,4’-二氯苯丙酮的合成
        3.4.2 1 -(4-氯-苯基)丙烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的合成
        3.4.3 ER的純化
        3.4.4 ER催化3,4’-二氯苯丙酮制備4’-氯苯丙酮
        3.4.5 ER催化脫鹵反應(yīng)的參數(shù)優(yōu)化
        3.4.6 ER催化脫鹵反應(yīng)機(jī)制的初步研究
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
科研成果
致謝



本文編號(hào)：3851307