小麥（Triticum aestivum.L）是世界上最重要的糧食作物之一,干旱、寒冷、高鹽等非生物脅迫嚴(yán)重影響小麥的生長發(fā)育及產(chǎn)量,因此研究小麥等植物對于非生物脅迫的響應(yīng)的調(diào)節(jié)機(jī)制是植物學(xué)重要研究課題之一。脫落酸（Abscisic acid,ABA）作為植物激素之一,參與植物許多生理過程的調(diào)控,尤其在響應(yīng)非生物脅迫方面發(fā)揮重要作用,被稱為脅迫激素。9-順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase,NCED）是ABA生物合成的關(guān)鍵酶。本研究從小麥葉片中分離到一個(gè)NCED基因,命名為TaNCED3。序列分析表明,TaNCED3基因的開放閱讀框（ORF）長度為1887bp,編碼628個(gè)氨基酸,在其編碼蛋白的N端存在葉綠體轉(zhuǎn)移肽序列。通過多序列比對,TaNCED3蛋白與其他物種的NCED蛋白具有很高的相似性。熒光實(shí)時(shí)定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,TaNCED3基因的轉(zhuǎn)錄受到外加甘露醇和ABA的誘導(dǎo),顯著上調(diào),但對高鹽和低溫的誘導(dǎo)沒有響應(yīng)。在擬南芥中過量表達(dá)TaNCED3基因后,其ABA含量在正常生長狀態(tài)及干旱脅迫條件下均顯著增加。同野生型相比,轉(zhuǎn)基因植... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 脫落酸的發(fā)現(xiàn)、生理功能及合成
        1.1.1 ABA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 脫落酸的生理作用
        1.1.3 ABA的生物合成
    1.2 高等植物NCED基因的研究
        1.2.1 NCED基因研究進(jìn)展
        1.2.2 模式植物擬南芥的NCED基因
        1.2.3 NCED基因功能的研究
    1.3 本研究的目的及意義
    1.4 本研究的技術(shù)路線
2 TaNCED3基因的克隆及序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小麥Total RNA提取
        2.2.2 小麥Total RNA的純化
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.4 小麥TaNCED3基因的PCR擴(kuò)增
        2.2.5 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化和回收
        2.2.6 TaNCED3基因的克隆
        2.2.7 小麥TaNCED3基因的序列分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 小麥Total RNA提取
        2.3.2 TaNCED3基因的克隆
        2.3.3 TaNCED3基因序列特征
        2.3.4 小麥TaNCED3蛋白與其他植物NCED蛋白的氨基酸序列比對
    2.4 討論
3 TaNCED3基因表達(dá)特性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 材料處理
        3.2.2 Total RNA提取及檢測
        3.2.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        3.2.4 熒光實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 小麥脅迫處理樣品Total RNA提取
        3.3.2 脅迫條件下TaNCED3基因在小麥葉片中的表達(dá)
    3.4 討論
4 TaNCED3基因轉(zhuǎn)化擬南芥及陽性植株的篩選
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株與載體
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 設(shè)備儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 植物表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.3 擬南芥轉(zhuǎn)化
        4.2.4 陽性植株篩選及PCR鑒定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 植物表達(dá)載體構(gòu)建
        4.3.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定
    4.4 討論
5 轉(zhuǎn)基因擬南芥生理指標(biāo)測定
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 設(shè)備儀器
    5.2 方法
        5.2.1 ABA含量測定
        5.2.2 氣孔導(dǎo)度和失水率測定
        5.2.3 脯氨酸含量測定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 ABA含量測定
        5.3.2 氣孔導(dǎo)度和失水率的測定
        5.3.3 脯氨酸含量測定
    5.4 討論
6 轉(zhuǎn)基因擬南芥抗旱鑒定及種子萌發(fā)率測定
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.1.3 設(shè)備儀器
    6.2 方法
        6.2.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥耐旱性分析
        6.2.2 種子萌發(fā)率分析
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥的耐旱性分析
        6.3.2 種子萌發(fā)分析
    6.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A ：培養(yǎng)基配方
附錄B ：DNA Makers
附錄C ：載體圖譜
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號：3698763