近年來(lái),大量研究證實(shí),大型真菌漆酶具有降解染料和農(nóng)藥的作用,在污水處理和環(huán)境修復(fù)方面具有廣闊的應(yīng)用前景。鑒于此,本研究以花臉香蘑菌株JZ05為試驗(yàn)材料,篩選并優(yōu)化了該菌株的菌絲培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件;優(yōu)化了該菌株產(chǎn)漆酶的液體發(fā)酵條件;然后以花臉香蘑發(fā)酵液為粗酶液,利用離子交換層析等純化方法,對(duì)花臉香蘑漆酶進(jìn)行分離純化與鑒定;最后研究了花臉香蘑發(fā)酵液和漆酶對(duì)染料的降解效果。通過(guò)以上試驗(yàn),得出以下結(jié)論:1.花臉香蘑菌株JZ05母種的最適碳源為玉米粉,最適氮源為蛋白胨,培養(yǎng)基的最適碳氮比為40:1,菌絲最適生長(zhǎng)溫度為23℃,最適酸堿度為pH 7.0;花臉香蘑漆酶液體發(fā)酵的最佳條件為:最適轉(zhuǎn)速150 rpm,最適接種量為12片0.5 mm菌片,最適培養(yǎng)溫度27℃。在液體培養(yǎng)基中添加玉米粉可以提高漆酶的產(chǎn)量,且最適的玉米粉添加量為1.0 g/L。2.以花臉香蘑的液體發(fā)酵液作為粗酶液,通過(guò)優(yōu)化DEAE-Sephadex弱陰離子交換層析、Q-Sepharose強(qiáng)陰離子交換層析、SP-Sepharose強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析等方法,得到電泳純級(jí)別的花臉香蘑漆酶,SDS-PAGE檢測(cè)顯示為單一條帶,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1.引言
    1.1 花臉香蘑概述
        1.1.1 花臉香蘑生物學(xué)特征
        1.1.2 花臉香蘑中的活性成分及藥理作用
    1.2 漆酶研究現(xiàn)狀
        1.2.1 漆酶的發(fā)現(xiàn)及功能
        1.2.2 漆酶的機(jī)構(gòu)及催化反應(yīng)原理
        1.2.3 漆酶的理化性質(zhì)
        1.2.4 漆酶的應(yīng)用
    1.3 蛋白質(zhì)的純化及鑒定概述
        1.3.1 根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)不同進(jìn)行分離
        1.3.2 根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同進(jìn)行分離
        1.3.3 根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 供試菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基及溶劑配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株篩選與鑒定
        2.2.2 花臉香蘑菌絲培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件的優(yōu)化
        2.2.3 提高花臉香蘑漆酶產(chǎn)量的發(fā)酵條件的優(yōu)化
        2.2.4 花臉香蘑漆酶的分離純化、鑒定及酶學(xué)特性研究
        2.2.5 漆酶Lac-LS對(duì)染料的降解效果研究
3 結(jié)果與分析
    3.1 菌種篩選與鑒定
        3.1.1 漆酶高產(chǎn)菌株篩選
        3.1.2 菌種鑒定
    3.2 花臉香蘑菌絲培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件的優(yōu)化
        3.2.1 花臉香蘑最適碳源的篩選
        3.2.2 花臉香蘑最適氮源的篩選
        3.2.3 花臉香蘑最適碳氮比的篩選
        3.2.4 花臉香蘑最適培養(yǎng)溫度的篩選
        3.2.5 花臉香蘑最適pH的篩選
    3.3 提高花臉香蘑漆酶產(chǎn)量的發(fā)酵條件的優(yōu)化
        3.3.1 轉(zhuǎn)速對(duì)花臉香蘑發(fā)酵液漆酶產(chǎn)量的影響
        3.3.2 溫度對(duì)花臉香蘑發(fā)酵液漆酶產(chǎn)量的影響
        3.3.3 接種量對(duì)花臉香蘑發(fā)酵液漆酶產(chǎn)量的影響
        3.3.4 玉米粉對(duì)花臉香蘑發(fā)酵液漆酶產(chǎn)量的影響
        3.3.5 銅離子對(duì)花臉香蘑發(fā)酵液漆酶產(chǎn)量的影響
    3.4 花臉香蘑漆酶的分離純化、鑒定及酶學(xué)特性研究
        3.4.1 DEAE-Sephadex弱陰離子交換層析
        3.4.2 Q-Sepharose強(qiáng)陰離子交換層析
        3.4.3 SP-Sepharose強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析
        3.4.4 SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)
        3.4.5 花臉香蘑漆酶的分子量測(cè)定
        3.4.6 漆酶Lac-LS內(nèi)部肽段序列測(cè)定及分析
        3.4.7 漆酶Lac-LS的 N端序列測(cè)定及分析
        3.4.8 gene4851 基因和gene4851 漆酶的分析
        3.4.9 花臉香蘑漆酶 Lac-LS 酶學(xué)特性分析
    3.5 漆酶Lac-LS對(duì)染料的降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5.1 發(fā)酵液與漆酶Lac-LS對(duì)染料的降解效果
        3.5.2 漆酶Lac-LS對(duì)染料的降解效果
        3.5.3 漆酶Lac-LS降解染料的HPLC檢測(cè)結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]刺芹側(cè)耳產(chǎn)漆酶條件優(yōu)化及對(duì)偶氮染料甲基橙的脫色[J]. 譚小珊,王帥杰,吳科元,齊鵬,胡佩雯,張靜.  菌物學(xué)報(bào). 2019(10)
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[4]一株野生香蘑屬真菌的鑒定及其生物學(xué)性質(zhì)[J]. 王紅艷,孔維祎,王竹青,孟德龍,丁強(qiáng),王鴻磊.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(06)
[5]核桃細(xì)菌性黑斑病菌分泌蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及特征分析[J]. 祝友朋,韓長(zhǎng)志,熊智.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(02)
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[7]漆酶對(duì)活性染料模擬廢液的催化脫色性能研究[J]. 陳榮平,翦育林,陳鎮(zhèn),汪南方,周文常.  湖南工程學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(03)
[8]云南1株香蘑屬野生菌株的分離鑒定及其原種培養(yǎng)基的篩選[J]. 岳萬(wàn)松,馬明,楊珍福,郭相,周汐,桂明英.  中國(guó)食用菌. 2018(04)
[9]泰山花臉香蘑的生物學(xué)特性研究[J]. 崔曉,王慶武,安秀榮,唐麗娜.  食藥用菌. 2017(06)
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博士論文
[1]蛋白質(zhì)超濾分離的機(jī)理及其應(yīng)用研究[D]. 王晶冰.中國(guó)石油大學(xué) 2011
[2]粗毛栓菌Trametes hirsuta lg-9非典型漆酶的研究[D]. 張海波.山東大學(xué) 2010

碩士論文
[1]白腐菌Pleurotus ostreatus漆酶純化和酶學(xué)性質(zhì)研究[D]. 馬倩倩.遼寧工業(yè)大學(xué) 2019
[2]花臉香蘑的液體發(fā)酵條件篩選及多糖提取方法優(yōu)化[D]. 唐萌.吉林大學(xué) 2017
[3]花臉香蘑液體發(fā)酵及其多糖的提取和免疫活性初步研究[D]. 劉法顯.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2016
[4]黑木耳蛋白質(zhì)的提取、分離純化及特性研究[D]. 林洋.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[5]銀杏種仁抑菌蛋白的提取分離及抑菌性研究[D]. 華菁.南京林業(yè)大學(xué) 2014
[6]銅離子誘導(dǎo)白腐菌高產(chǎn)漆酶及其用于降解染料的研究[D]. 張麗.華南理工大學(xué) 2013
[7]3種食用菌活性物質(zhì)的分離純化及結(jié)構(gòu)分析[D]. 吳小君.福建師范大學(xué) 2013
[8]花臉香蘑田間栽培、營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)及液體發(fā)酵特性研究[D]. 胡先運(yùn).貴州師范大學(xué) 2007



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