腸膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）是乳酸菌中明串珠菌屬的代表菌種,它不僅可用于發(fā)酵各種食品,而且分泌的胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）具有特殊的生理生化特征和生物活性,近年來備受關(guān)注。因此,研究以遼寧省自然發(fā)酵豆醬為研究對象,從中分離篩選出一株分高產(chǎn)胞外多糖的腸膜明串珠菌SN-8,并對其多糖進(jìn)行分離,純化,結(jié)構(gòu)解析及功能特性分析,結(jié)果如下:1.試驗(yàn)從遼寧省阜新市采集的自然發(fā)酵豆醬中,利用粘度測量法和多糖含量測定,分離篩選到一株高產(chǎn)EPS的菌株。經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察,生理生化試驗(yàn)和16S rDNA序列分析,鑒定為腸膜明串珠菌（Leu.mesenteroides）,并將其命名為Leu.mesenteroides SN-8。2.將該菌珠接種于乳酸細(xì)菌產(chǎn)糖培養(yǎng)基DeMan Rogosa Sharp-sugar producing（MRS-S）中,28℃恒溫培養(yǎng)48 h獲得EPS發(fā)酵液。經(jīng)離心,除蛋白,醇沉,透析,冷凍干燥得到粗多糖,其產(chǎn)量為2.42 g/L。進(jìn)一步利用純凈水透析,葡聚糖凝膠過濾柱Sephadex G-100進(jìn)行過濾層析,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌株SN1-8在MRS培養(yǎng)基中(28℃)的生長曲線

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文21圖2-2菌株SN1-8在MRS培養(yǎng)基中(28℃)的生長曲線Fig.2-2GrowthcurveofthestrainSN-8culturedinMRS（28°C）2.3.516SrDNA序列同源性鑒定結(jié)果采用細(xì)菌基因提取試劑盒（Tiangen）提取菌株SN1-8的DNA基因組，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增菌株的16SrDNA序列，得到的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，結(jié)果如圖2-3所示。DNA條帶單一明亮，與DL2000DNAmarke:電泳結(jié)果比對，菌株的條帶在500-1000bp之間。圖2-3菌株的16SrDNAPCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.2-3Electrophoregramof16SrDNAamplificationproductsofSN1-8經(jīng)與GenBank數(shù)據(jù)庫比對，明串珠菌疑似菌株SN1-8與Leuconostocmesenteroides同源性為99.79%。應(yīng)用Mega7.0.26軟件中的Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，最終結(jié)果如圖2-4所示。所以，鑒定菌株SN1-8為Leu.mesenteroides.

22圖2-4Neighbor-Joining法構(gòu)建菌株SN1-8的16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2-4UsingNeighbor-JoiningmethodtobuildPhylogenetictreeofSN1-8，basedon16SrDNAsequences因此，對菌株SN1-8進(jìn)行進(jìn)一步研究，并將其定名為LeuconostocmesenteroidesSN-8。2.3.6培養(yǎng)基優(yōu)化結(jié)果2.3.6.1最佳碳源的確定將菌株SN-8接種到MRS培養(yǎng)基中，不同碳源對菌株產(chǎn)糖情況影響見圖2-5(A)，菌株能夠利用蔗糖，巖藻糖，果糖，木糖和葡萄糖進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)糖，其中，由圖可知，當(dāng)以蔗糖為碳源時，菌株產(chǎn)糖量最高，這可可能與菌株含有的某些產(chǎn)糖酶有關(guān)。因此確定蔗糖為最佳碳源。2.3.6.2最佳氮源的確定將菌株SN-8接種到MRS培養(yǎng)基中，不同氮源對菌株產(chǎn)糖情況影響見圖2-5(B)，菌株能夠利用大豆蛋白胨，胰蛋白胨，酵母蛋白胨，蛋白胨進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)糖，由于其分子量的不同，菌株對不同氮源的利用程度也不一樣。其中，由圖可知，當(dāng)以蛋白胨為氮源時，菌株產(chǎn)糖量最高，因此確定蛋白胨為最佳氮源。2.3.6.3最佳磷酸鹽的確定將菌株SN-8接種到MRS培養(yǎng)基中，不同磷酸鹽對菌株產(chǎn)糖情況影響見圖2-5(C)，不同的磷酸鹽對于菌株產(chǎn)糖的促進(jìn)作用是不同的。菌株SN-8能夠利用KH2PO4，NaH2PO4，Na2HPO4，K2HPO4進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)糖，其中，由圖可知，當(dāng)以K2HPO4為磷酸鹽進(jìn)行發(fā)酵是時，菌株產(chǎn)糖量最高，因此確定K2HPO4為最佳磷酸鹽。2產(chǎn)胞外多糖腸膜明串珠菌的分離和鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3353971