背景哺乳動(dòng)物細(xì)胞間mRNA傳遞的現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)已久,由于缺乏有效的研究模型和手段,細(xì)胞間mRNA傳遞的機(jī)制以及mRNA在到達(dá)受體細(xì)胞后是否翻譯成蛋白質(zhì)并發(fā)揮其生物學(xué)功能仍有待研究。細(xì)胞疊套結(jié)構(gòu)（cell-in-cell structure,CICs）是指一個(gè)或多個(gè)活細(xì)胞鉆入另外一個(gè)活細(xì)胞后形成的細(xì)胞套細(xì)胞結(jié)構(gòu),鉆入細(xì)胞（效應(yīng)細(xì)胞）的主要命運(yùn)是在被鉆入細(xì)胞（靶細(xì)胞）中死亡（細(xì)胞胞內(nèi)死亡）,目前大多數(shù)研究都集中在cell-in-cell的發(fā)生機(jī)制以及內(nèi)部細(xì)胞的死亡方式上,而對(duì)于外部靶細(xì)胞命運(yùn)的研究及效靶細(xì)胞間是否存在mRNA等生物分子的傳遞則因缺少研究模型而長期受限。目的利用Cre-loxP重組酶系統(tǒng),以cell-in-cell結(jié)構(gòu)為研究模型,研究細(xì)胞間mRNA的交流和傳遞過程及其在靶細(xì)胞內(nèi)是否能夠發(fā)揮生物學(xué)功能,并探討cell-in-cell在細(xì)胞通訊中所發(fā)揮的作用。方法構(gòu)建Plvx-IRES-Neo-Cre慢病毒重組質(zhì)粒,在HEK293FT細(xì)胞中包裝病毒,將包裝好的病毒感染不同的上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞系,經(jīng)抗生素篩選后,利用免疫熒光篩選和鑒定高表達(dá)Cre的細(xì)胞,然后建立表達(dá)Cre的單克隆細(xì)胞株（... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

基于Cre-loxP重組酶系統(tǒng)的細(xì)胞間信息傳遞研究模型示意圖

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文262.結(jié)果2.1成功構(gòu)建攜帶loxP-DsRed-loxP-eGFP序列的靶細(xì)胞和穩(wěn)定表達(dá)Cre蛋白的效應(yīng)細(xì)胞將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的效應(yīng)細(xì)胞及病毒感染后的靶細(xì)胞用相應(yīng)抗生素進(jìn)行加壓篩選，得到穩(wěn)株細(xì)胞利用有限稀釋法進(jìn)行單克隆細(xì)胞的制備，培養(yǎng)3-4w后，將挑選出的單克隆陽性細(xì)胞孔進(jìn)行擴(kuò)增。取部分制備的單克隆靶細(xì)胞接種于爬片上過夜培養(yǎng)，固定、封片后共聚焦顯微鏡下觀察并篩選出全部表達(dá)DsRed熒光而不表達(dá)eGFP熒光的單克隆細(xì)胞株（圖2A）；同樣地，取部分初步制備的單克隆效應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，鏡下挑選出Cre蛋白高表達(dá)的單克隆細(xì)胞株，用Westernblot對(duì)挑選的細(xì)胞株再次加以驗(yàn)證（圖2B和2C）；結(jié)果提示我們構(gòu)建的單克隆效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞均符合預(yù)期。圖2構(gòu)建的效應(yīng)細(xì)胞及靶細(xì)胞。A：攜帶loxP-DsRed-loxP-eGFP序列的MCF7細(xì)胞熒光表達(dá)情況（紅色：DsRed細(xì)胞自帶熒光；藍(lán)色：DAPI染色指示細(xì)胞核）；B：穩(wěn)定表達(dá)Cre蛋白的PLC/PRF/5細(xì)胞的熒光表達(dá)情況（紫色：抗Cre抗體；藍(lán)色：DAPI染色指示細(xì)胞核）；C：穩(wěn)定表達(dá)Cre蛋白的MCF10a細(xì)胞的Westernblot驗(yàn)證結(jié)果2.2Cre蛋白可以介導(dǎo)靶細(xì)胞發(fā)生基因重組并表達(dá)eGFP信號(hào)Cre蛋白能夠識(shí)別細(xì)胞基因組中的loxP位點(diǎn)并將該位點(diǎn)之間的DNA切下，使細(xì)

Cre-loxP重組酶系統(tǒng)的驗(yàn)證

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌作用在神經(jīng)系統(tǒng)中作用研究進(jìn)展[J]. 趙婧鈺,郭荷娜,楊謙.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(86)
[2]間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌作用的研究進(jìn)展[J]. 劉湄漪,陳乃耀.  中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2018(04)
[3]促甲狀腺激素及其自身抗體在自身免疫性甲狀腺疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 牟衛(wèi)東,朱雪琳,黃小華,姜霞.  國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2018(12)
[4]促甲狀腺激素受體抗體檢測的臨床應(yīng)用[J]. 李雪梅.  中國實(shí)用醫(yī)藥. 2016(23)
[5]生長激素自分泌作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 齊傳翔,楊開典,祁鈺鈺,鞠輝明.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(05)
[6]Rho-ROCK信號(hào)通路功能及其活性調(diào)節(jié)[J]. 曹美霞,屈長青.  生物學(xué)雜志. 2015(06)
[7]星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元間通訊的研究進(jìn)展[J]. 接琳琳,管英俊,陳燕春,周風(fēng)華,趙會(huì),丁寶龍.  解剖科學(xué)進(jìn)展. 2014(06)
[8]多細(xì)胞生物細(xì)胞間的通訊方式[J]. 李江肅.  生物學(xué)教學(xué). 2012(01)
[9]細(xì)胞間隙連接通訊與腫瘤[J]. 程蕾,李靜,耿美玉.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(04)
[10]細(xì)胞通訊研究的新進(jìn)展及重要性[J]. 張錦珠.  科技導(dǎo)報(bào). 1994(06)



本文編號(hào)：2948071