本文關(guān)鍵詞：斑馬魚(yú)補(bǔ)體基因在早期胚胎以及LPS刺激胚胎中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：補(bǔ)體系統(tǒng)是先天性免疫的重要組成部分。在魚(yú)類(lèi)中,其胚胎體外受精并發(fā)育,水中大量病原體直接接觸胚胎。魚(yú)類(lèi)特異性免疫于脊椎動(dòng)物中發(fā)育程度較低,免疫球蛋白種類(lèi)和數(shù)量均有限。且在胚胎發(fā)育早期,特異性免疫系統(tǒng)尚未成熟,非特異性免疫尤其是補(bǔ)體系統(tǒng)在胚胎發(fā)育中的構(gòu)建對(duì)其抵御外界病原體的入侵具有重要的意義。斑馬魚(yú)作為發(fā)育生物學(xué)及免疫學(xué)研究的模式生物,其大量補(bǔ)體基因包括三條補(bǔ)體激活通路及溶膜途徑的主要因子以及多種補(bǔ)體調(diào)節(jié)基因已被鑒定,但在表達(dá)及功能上的研究較少,其中關(guān)于胚胎期這些基因作用的研究更鮮有報(bào)道。本文以模式生物斑馬魚(yú)為研究對(duì)象,使用原位雜交及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),對(duì)斑馬魚(yú)補(bǔ)體基因(C3、C4、C9、Bf1、Bf2、Bf2)及其調(diào)節(jié)基因(RCA2.1、RCA2.2)在早期胚胎中的時(shí)空表達(dá)模式及LPS注射刺激后表達(dá)量的變化進(jìn)行了研究。本文首次通過(guò)原位雜交的方式研究了上述幾個(gè)重要補(bǔ)體基因尤其是Bf2、Bf3兩個(gè)亞型及RCA2.1、RCA2.2兩個(gè)補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子在早期胚胎中的表達(dá)圖式。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上述基因在胚胎早期(卵裂期至體節(jié)期)均為泛表達(dá),于受精后24 h主要集中表達(dá)在頭部,而在孵化后的幼魚(yú)階段特異性表達(dá)在肝臟及消化道等部位,這些組織器官為補(bǔ)體早期表達(dá)的主要部位。在斑馬魚(yú)成魚(yú)中這些補(bǔ)體基因也主要表達(dá)在肝臟及消化道,本實(shí)驗(yàn)證明斑馬魚(yú)在幼魚(yú)期即形成了這種表達(dá)模式。對(duì)胚胎顯微注射LPS后,C3、C9、Bf1、 Bf2、Bf3基因在早期胚胎中表達(dá)上調(diào),RCA2.1基因表達(dá)下調(diào),這與斑馬魚(yú)成魚(yú)受到革藍(lán)氏陰性菌感染后補(bǔ)體分子(C3、C9、B因子等)的反應(yīng)類(lèi)似,表明其參與補(bǔ)體激活途徑、溶膜途徑及補(bǔ)體調(diào)節(jié),提示斑馬魚(yú)可在胚胎發(fā)育早期構(gòu)建補(bǔ)體系統(tǒng)參與急性期反應(yīng)等免疫反應(yīng)。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,斑馬魚(yú)C2/Bf三個(gè)基因亞型中,Bfl同哺乳動(dòng)物的C2處于同一進(jìn)化分支,而B(niǎo)f2及Bf3與哺乳動(dòng)物B因子親緣關(guān)心更近。在LPS刺激后Bf2及Bf3反應(yīng)較快,而與C2相似的Bfl反應(yīng)慢,同時(shí)參與經(jīng)典途徑和凝集素途徑的C4基因反應(yīng)無(wú)規(guī)律,由此推測(cè)斑馬魚(yú)早期胚胎發(fā)育過(guò)程中針對(duì)外界炎癥反應(yīng)物刺激,補(bǔ)體系統(tǒng)的激活主要經(jīng)由替代途徑。這可能同魚(yú)類(lèi)中替代途徑的高滴度和替代途徑本身在進(jìn)化上的原始性有關(guān)。此外,有研究表明B因子的三個(gè)亞型均由一個(gè)共同基因復(fù)制而來(lái),RCA家族的兩個(gè)基因也是如此。在LPS刺激后,這幾個(gè)基因同其亞型的反應(yīng)均不相同。表明斑馬魚(yú)Bf/C2三個(gè)亞型間及RCA2.1、RCA2.2兩補(bǔ)體調(diào)節(jié)基因間不是簡(jiǎn)單的復(fù)制基因,而是已經(jīng)有表達(dá)差異和功能分化�？傊�,本文首次報(bào)道了斑馬魚(yú)補(bǔ)體基因在早期胚胎中的表達(dá)圖式及其在LPS刺激下的表達(dá)模式,表明在斑馬魚(yú)早期胚胎發(fā)育過(guò)程中可通過(guò)替代途徑進(jìn)行補(bǔ)體激活,并可進(jìn)行補(bǔ)體因子的調(diào)節(jié),為深入研究魚(yú)類(lèi)補(bǔ)體系統(tǒng)發(fā)育提供了新的信息。
【關(guān)鍵詞】：補(bǔ)體 斑馬魚(yú) 胚胎 LPS 表達(dá)模式
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：Q954.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-23
• 1 模式生物斑馬魚(yú)11-12
• 1.1 基本特征11
• 1.2 免疫學(xué)研究11-12
• 2 補(bǔ)體系統(tǒng)概述12-21
• 2.1 發(fā)現(xiàn)及命名12
• 2.2 補(bǔ)體活化12-15
• 2.2.1 經(jīng)典途徑13-14
• 2.2.2 凝集素途徑14
• 2.2.3 替代途徑14-15
• 2.2.4 終末途徑15
• 2.3 補(bǔ)體激活調(diào)控及調(diào)控因子15-17
• 2.3.1 補(bǔ)體激活途徑調(diào)節(jié)16-17
• 2.3.2 補(bǔ)體終末途徑調(diào)節(jié)17
• 2.4 魚(yú)類(lèi)補(bǔ)體17-21
• 2.4.1 魚(yú)類(lèi)補(bǔ)體特點(diǎn)18
• 2.4.2 魚(yú)類(lèi)補(bǔ)體主要成分18-21
• 3 研究目的與技術(shù)路線21-23
• 3.1 研究目的21-22
• 3.2 技術(shù)路線22-23
• 第二章 斑馬魚(yú)補(bǔ)體基因在早期胚胎中的表達(dá)圖式及LPS刺激下的表達(dá)模式23-80
• 1 前言23-24
• 2 材料與方法24-51
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器24-26
• 2.1.1 斑馬魚(yú)24
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑24-25
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器耗材25-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-51
• 2.2.1 斑馬魚(yú)補(bǔ)體及其調(diào)節(jié)因子基因和蛋白生物信息學(xué)分析26-27
• 2.2.2 斑馬魚(yú)各時(shí)期胚胎mRNA提取與cDNA制備27-31
• 2.2.3 斑馬魚(yú)補(bǔ)體和其調(diào)節(jié)因子基因擴(kuò)增及mRNA探針制備31-42
• 2.2.4 斑馬魚(yú)早期胚胎原位雜交42-46
• 2.2.5 斑馬魚(yú)補(bǔ)體基因real-time PCR檢測(cè)LPS刺激下表達(dá)量變化46-51
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-77
• 3.1 補(bǔ)體及其調(diào)節(jié)因子基因生物信息學(xué)分析51-64
• 3.1.1 補(bǔ)體及其調(diào)節(jié)因子基因序列分析51-53
• 3.1.2 補(bǔ)體及其調(diào)節(jié)因子蛋白序列及結(jié)構(gòu)分析53-61
• 3.1.3 補(bǔ)體及其調(diào)節(jié)因子基因蛋白序列同源比對(duì)61-64
• 3.2 斑馬魚(yú)各時(shí)期胚胎mRNA提取與cDNA制備64-65
• 3.3 斑馬魚(yú)補(bǔ)體和其調(diào)節(jié)因子基因擴(kuò)增及mRNA探針制備65-66
• 3.4 斑馬魚(yú)早期胚胎原位雜交66-72
• 3.5 斑馬魚(yú)補(bǔ)體基因real-time PCR檢測(cè)LPS刺激下表達(dá)量變化72-77
• 4 討論77-80
• 小結(jié)80-81
• 參考文獻(xiàn)81-88
• 附錄88-90
• 致謝90-91
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷91
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文91

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本文編號(hào)：273683