本文關(guān)鍵詞：豬卵原干細(xì)胞體外分離、建系及其功能研究　出處：《內(nèi)蒙古大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 豬 卵原干細(xì)胞 Fragilis 卵母細(xì)胞 干細(xì)胞

【摘要】：我們采取初情期的內(nèi)蒙古白豬卵巢,用膠原酶對(duì)皮質(zhì)組織消化處理,制備卵巢皮質(zhì)組織單細(xì)胞懸液,再通過(guò)差速貼壁和抗體-磁珠分選法結(jié)合的方法富集卵原干細(xì)胞。在本實(shí)驗(yàn)中,我們采用的分選靶蛋白為Fragilis,最后將富含卵原干細(xì)胞的細(xì)胞懸液置于含有血清、EGF、BFGF、LIF的培養(yǎng)液中,在38.5℃、5%CO2的環(huán)境下培養(yǎng),并對(duì)獲得的卵原干細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性驗(yàn)證。在培養(yǎng)5-7天后,出現(xiàn)卵原干細(xì)胞克隆,以后每隔2-3天傳代一次,現(xiàn)在該細(xì)胞系在體外已經(jīng)傳代56代,豬卵原干細(xì)胞的克隆細(xì)胞與小鼠卵原干細(xì)胞的形態(tài)相似,細(xì)胞界限清晰,核質(zhì)比大,體外傳代次數(shù)超過(guò)6代后,小部分的卵原干細(xì)胞開(kāi)始自發(fā)分化,細(xì)胞的體積增大,其直徑可達(dá)60μm,形成卵母細(xì)胞樣細(xì)胞,并且在卵母細(xì)胞樣細(xì)胞外周形成透明帶樣結(jié)構(gòu),免疫熒光分析顯示該結(jié)構(gòu)與ZP3蛋白的抗體特異結(jié)合,免疫熒光染色顯示這類細(xì)胞表達(dá)Scp3蛋白,表明這些卵母細(xì)胞樣細(xì)胞處于減數(shù)分裂期。經(jīng)免疫熒光檢測(cè)、RT-PCR基因表達(dá)分析結(jié)果顯示豬卵原干細(xì)胞表達(dá)Oct4、DDX4、C-kit、Nanog、Stella、Ifitm3、Blimp1等干細(xì)胞標(biāo)記基因。核型分析顯示我們建立的豬卵原干細(xì)胞系含有38條染色體,其中2條為XX性染色體。以上結(jié)果表明該細(xì)胞系具有卵原干細(xì)胞的全部特性,證明我們?cè)隗w外成功構(gòu)建了豬卵原干細(xì)胞系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q813.1

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本文編號(hào)：1348061