本文關(guān)鍵詞：萊茵衣藻miRNA1166.1的靶基因預(yù)測及其分析

  更多相關(guān)文章： 綠藻 萊茵衣藻 microRNA 靶基因 熒光素酶報告載體

【摘要】：基因的表達過程受到多方面的調(diào)控,內(nèi)源基因編碼的非編碼單鏈micro RNA(mi RNA)在動植物中的調(diào)控作用的重要性已經(jīng)被廣泛認(rèn)識。本課題組在前期工作中,采用高豐度的cre-MIR1162 MI0006223作為內(nèi)源性mi RNA1166.1的表達骨架,成功構(gòu)建人工mi RNA1166.1序列,轉(zhuǎn)入萊茵衣藻細(xì)胞并篩選獲得高產(chǎn)氫衣藻轉(zhuǎn)化子。在此基礎(chǔ)上,本研究對高產(chǎn)氫衣藻轉(zhuǎn)化子中內(nèi)源性mi RNA1166.1的靶基因進行預(yù)測,探究其功能并構(gòu)建了一個用于驗證mi RNA的靶基因的熒光素酶報告載體。具體結(jié)果如下:1.利用WMD3網(wǎng)站預(yù)測萊茵衣藻內(nèi)源性mi RNA1166.1的靶基因,篩選了12個可靠性最高的預(yù)測靶基因;2.利用q RT-PCR技術(shù)驗證高產(chǎn)氫衣藻轉(zhuǎn)化子T-mi RNA1166.1-1、T-mi RNA1166.1-2中mi RNA1166.1的表達量,與野生型對照組相比,衣藻轉(zhuǎn)化子mi RNA1166.1的表達量平均為對照組的5倍以上;3.利用q RT-PCR技術(shù)檢測12個預(yù)測靶基因的基因表達量,其中Cre11.g472700,Cre22.g763650,Cre09.g407501靶基因的基因表達量均呈顯著性下調(diào)趨勢:轉(zhuǎn)化子T-mi RNA1166.1-1的Cre11.g472700,Cre22.g763650,Cre09.g407501靶基因相對表達量分別為0.310、0.373、0.476,基因表達量顯著性低于野生型對照組;轉(zhuǎn)化子T-mi RNA1166.1-2的Cre11.g472700,Cre22.g763650,Cre09.g407501靶基因相對表達量分別為0.262、0.500、0.684,基因表達量亦為顯著性低于野生型對照組;相對于野生型對照組,Cre17.g696700,Cre03.g189000靶基因相對表達量均為上調(diào);Cre03.g169150,Cre01.g064550靶基因相對表達量均無顯著性差異;Cre03.g151000,Cre13.g571400靶基因相對表達量在兩個轉(zhuǎn)化子中均呈現(xiàn)出不同的趨勢;4.成功構(gòu)建了p DL-8×靶基因的熒光素酶報告載體,該載體由萊茵衣藻組成型高表達的Psa D基因5’端和3’端片段、Luc基因、Cre05.g238140靶基因的8×靶序列組成,通過“珠磨法”對萊茵衣藻進行遺傳轉(zhuǎn)化;5.利用q RT-PCR技術(shù)檢測7個轉(zhuǎn)化子T-p DL-8×target的Luc基因的基因表達量,與野生型對照組相比,7個轉(zhuǎn)化子均呈現(xiàn)出Luc報告基因被顯著性沉默的現(xiàn)象;6.檢測7個轉(zhuǎn)化子T-p DL-8×target的Luc酶的化學(xué)發(fā)光信號,與野生型對照組相比,7個轉(zhuǎn)化子均呈現(xiàn)出化學(xué)發(fā)光顯著性減弱的現(xiàn)象,結(jié)果與上述Luc基因表達量一致。綜上所述,本研究探索了一種萊茵衣藻內(nèi)源性micro RNA靶基因的篩選、驗證方法,利用q RT-PCR和熒光素酶報告載體相結(jié)合的技術(shù),初步驗證了萊茵衣藻mi RNA1166.1的靶基因,為單細(xì)胞真核綠藻的非編碼RNA的功能與靶基因生物學(xué)預(yù)測開辟了新方向。
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q943.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 岳建宇;費忠安;郎小強;徐輝;喬代蓉;曹毅;;基于全基因組預(yù)測萊茵衣藻的新miRNA及其靶基因[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報;2015年01期

2 李世風(fēng);張寧;劉柏林;杜宏輝;司懷軍;王蒂;;馬鈴薯microRNA及其靶基因的預(yù)測與功能分析[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2010年06期

3 潘玉欣;劉恒蔚;;花生miRNA與其靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測[J];中國油料作物學(xué)報;2010年02期

4 ;Prediction of sorghum miRNAs and their targets with computational methods[J];Chinese Science Bulletin;2010年13期

5 陳旭;李晚忱;付鳳玲;;玉米microRNAs及其靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測[J];遺傳;2009年11期

，

本文編號：1285479