本文關(guān)鍵詞：萊茵衣藻miRNA1166.1的靶基因預(yù)測(cè)及其分析

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【摘要】：基因的表達(dá)過程受到多方面的調(diào)控,內(nèi)源基因編碼的非編碼單鏈micro RNA(mi RNA)在動(dòng)植物中的調(diào)控作用的重要性已經(jīng)被廣泛認(rèn)識(shí)。本課題組在前期工作中,采用高豐度的cre-MIR1162 MI0006223作為內(nèi)源性mi RNA1166.1的表達(dá)骨架,成功構(gòu)建人工mi RNA1166.1序列,轉(zhuǎn)入萊茵衣藻細(xì)胞并篩選獲得高產(chǎn)氫衣藻轉(zhuǎn)化子。在此基礎(chǔ)上,本研究對(duì)高產(chǎn)氫衣藻轉(zhuǎn)化子中內(nèi)源性mi RNA1166.1的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè),探究其功能并構(gòu)建了一個(gè)用于驗(yàn)證mi RNA的靶基因的熒光素酶報(bào)告載體。具體結(jié)果如下:1.利用WMD3網(wǎng)站預(yù)測(cè)萊茵衣藻內(nèi)源性mi RNA1166.1的靶基因,篩選了12個(gè)可靠性最高的預(yù)測(cè)靶基因;2.利用q RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證高產(chǎn)氫衣藻轉(zhuǎn)化子T-mi RNA1166.1-1、T-mi RNA1166.1-2中mi RNA1166.1的表達(dá)量,與野生型對(duì)照組相比,衣藻轉(zhuǎn)化子mi RNA1166.1的表達(dá)量平均為對(duì)照組的5倍以上;3.利用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)12個(gè)預(yù)測(cè)靶基因的基因表達(dá)量,其中Cre11.g472700,Cre22.g763650,Cre09.g407501靶基因的基因表達(dá)量均呈顯著性下調(diào)趨勢(shì):轉(zhuǎn)化子T-mi RNA1166.1-1的Cre11.g472700,Cre22.g763650,Cre09.g407501靶基因相對(duì)表達(dá)量分別為0.310、0.373、0.476,基因表達(dá)量顯著性低于野生型對(duì)照組;轉(zhuǎn)化子T-mi RNA1166.1-2的Cre11.g472700,Cre22.g763650,Cre09.g407501靶基因相對(duì)表達(dá)量分別為0.262、0.500、0.684,基因表達(dá)量亦為顯著性低于野生型對(duì)照組;相對(duì)于野生型對(duì)照組,Cre17.g696700,Cre03.g189000靶基因相對(duì)表達(dá)量均為上調(diào);Cre03.g169150,Cre01.g064550靶基因相對(duì)表達(dá)量均無顯著性差異;Cre03.g151000,Cre13.g571400靶基因相對(duì)表達(dá)量在兩個(gè)轉(zhuǎn)化子中均呈現(xiàn)出不同的趨勢(shì);4.成功構(gòu)建了p DL-8×靶基因的熒光素酶報(bào)告載體,該載體由萊茵衣藻組成型高表達(dá)的Psa D基因5’端和3’端片段、Luc基因、Cre05.g238140靶基因的8×靶序列組成,通過“珠磨法”對(duì)萊茵衣藻進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化;5.利用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)7個(gè)轉(zhuǎn)化子T-p DL-8×target的Luc基因的基因表達(dá)量,與野生型對(duì)照組相比,7個(gè)轉(zhuǎn)化子均呈現(xiàn)出Luc報(bào)告基因被顯著性沉默的現(xiàn)象;6.檢測(cè)7個(gè)轉(zhuǎn)化子T-p DL-8×target的Luc酶的化學(xué)發(fā)光信號(hào),與野生型對(duì)照組相比,7個(gè)轉(zhuǎn)化子均呈現(xiàn)出化學(xué)發(fā)光顯著性減弱的現(xiàn)象,結(jié)果與上述Luc基因表達(dá)量一致。綜上所述,本研究探索了一種萊茵衣藻內(nèi)源性micro RNA靶基因的篩選、驗(yàn)證方法,利用q RT-PCR和熒光素酶報(bào)告載體相結(jié)合的技術(shù),初步驗(yàn)證了萊茵衣藻mi RNA1166.1的靶基因,為單細(xì)胞真核綠藻的非編碼RNA的功能與靶基因生物學(xué)預(yù)測(cè)開辟了新方向。
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號(hào)：1285479