本文選題：金屬硫蛋白 + 綠色熒光蛋白�。� 參考：《太原理工大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年06期

【摘要】：為了獲得可用于檢測環(huán)境中多種重金屬污染的遺傳改造生物細(xì)胞,將具有重金屬誘導(dǎo)特性的金屬硫蛋白基因MTT1啟動(dòng)子和外源報(bào)告基因綠色熒光蛋白gfp的融合序列,通過基因槍法轉(zhuǎn)染嗜熱四膜蟲細(xì)胞。經(jīng)同源重組和巴龍霉素抗性篩選,獲得穩(wěn)定的GFP遺傳改造四膜蟲細(xì)胞株。該細(xì)胞株經(jīng)Cd~(2+)誘導(dǎo),MTT1啟動(dòng)子可啟動(dòng)外源基因gfp正確表達(dá),在藍(lán)光激發(fā)下可發(fā)綠色熒光。GFP遺傳改造四膜蟲細(xì)胞對(duì)重金屬離子的熒光響應(yīng)效應(yīng)由大到小依次為Cd~(2+),Cr~(6+),Hg~(2+);響應(yīng)濃度范圍和具有劑量-效應(yīng)關(guān)系的濃度范圍由大到小依次為Cd~(2+),Hg~(2+),Cr~(6+);最低檢測限由大到小依次為Cr~(6+),Hg~(2+),Cd~(2+),而對(duì)Cu~(2+)無熒光響應(yīng)效應(yīng)。因此,GFP遺傳改造四膜蟲可作為環(huán)境中Cd~(2+)、Hg~(2+)和Cr~(6+)污染的生物檢測細(xì)胞。
[Abstract]:In order to obtain genetically modified biological cells which can be used to detect the contamination of many heavy metals in the environment, the fusion sequences of MTT1 promoter of metallothionein gene and green fluorescent protein gfp of exogenous reporter gene were obtained. Tetrahymena thermophilus cells were transfected by gene gun method. After homologous recombination and baromycin resistance screening, stable GFP genetically modified Tetrahymena cell lines were obtained. This cell line was induced by CDT-1) to initiate the correct expression of exogenous gene gfp. The fluorescence response of Tetrahymena cells to heavy metal ions can be transformed by green fluorescence. GFP under blue light. The order of fluorescence response to heavy metal ions is from large to small, the response concentration range and the concentration range with dose-effect relationship are from large to small. The lowest detection limit from large to small is CrGN 2 / HgCU, and the lowest detection limit is CrP6 / HgCU 2 / 2, and no fluorescence response is found to Cuzhuan2) in order of the lowest detection limit of CD / C ~ (2 +) and Cr ~ (2 +) / C ~ (2 +), and the lowest detection limit is Cr ~ (6) HG ~ (2 +) ~ (2). Therefore, the GFP genetic transformation of Tetrahymena can be used as a bioassay cell contaminated by CD ~ (2 +) H _ (G) ~ (2) and Cr ~ (3 +) ~ (6) in the environment.
【作者單位】： 太原理工大學(xué)信息工程學(xué)院;太原理工大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)青年基金資助項(xiàng)目(31501124) 山西省基礎(chǔ)研究青年基金資助項(xiàng)目(201502119)
【分類號(hào)】：X174

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本文編號(hào)：1995905