角膜緣干細(xì)胞(Limbal stem cells,LSCs)存在于角膜緣區(qū)域。在個體發(fā)育過程中,LSCs向心移行并分化為成熟角膜上皮細(xì)胞。據(jù)此,可以作為LSCs和成熟角膜上皮細(xì)胞的鑒定和定位的理論基礎(chǔ)。小鼠是重要的模式動物之一,但關(guān)于小鼠角膜緣細(xì)胞基因差異性表達(dá)的研究尚未見相關(guān)報道。本課題結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)和高通量組學(xué)技術(shù)探究小鼠眼角膜不同區(qū)域的差異表達(dá),加深人們對于小鼠眼角膜細(xì)胞基因差異性表達(dá)的認(rèn)知。SLC5A8是鈉偶聯(lián)的單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(也稱為SMCT1)參與乳酸和短鏈脂肪酸的運(yùn)載,這一運(yùn)載體不僅可以在卵細(xì)胞中表達(dá),在其他體細(xì)胞中也同樣表達(dá)。我們推測在小鼠角膜也會表達(dá)。本研究利用HE染色、免疫組化染色進(jìn)行小鼠眼角膜形態(tài)學(xué)觀察,界定角膜緣區(qū)域。在此基礎(chǔ)上,通過獲取角膜緣組織并將角膜緣區(qū)域根據(jù)冠狀面象限分為上(Superior,S)、下(Inferior,I)、鼻(Nasal,N)、顳(Temporal,T)四個組,以中央角膜區(qū)域和結(jié)膜區(qū)域作為對照組進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)。然后對測序結(jié)果進(jìn)行差異分析、GO注釋和KEGG通路分析。通過差異分析獲得細(xì)胞基因差異性表達(dá)的概況,篩選出有...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第1章 引言
    1.1 角膜與角膜緣
    1.2 角膜緣干細(xì)胞(LSCs)
        1.2.1 LSCs的功能
        1.2.2 LSCs的增殖與分化
        1.2.3 LSCs標(biāo)志物研究進(jìn)展
        1.2.4 LSCs的空間分布
    1.3 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)在LSCs上的應(yīng)用
    1.4 單分子RNA原位檢測在LSCs上的應(yīng)用
    1.5 Slc5a8 的研究進(jìn)展
    1.6 本課題的來源和意義
第2章 小鼠角膜緣區(qū)域的界定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)備與試劑配方
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 試劑配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 顯微鏡下觀察角膜組織形態(tài)
        2.2.2 石蠟切片的制作
        2.2.3 HE染色
        2.2.4 免疫組化
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        2.3.1 小鼠角膜的組織形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.2 小鼠角膜的HE染色
        2.3.3 小鼠眼球石蠟切片的免疫組化結(jié)果
    2.4 討論與小結(jié)
第3章 小鼠角膜緣組織轉(zhuǎn)錄組測序及差異表達(dá)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)備與試劑配方
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 試劑配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 RNA樣本的制備
        3.2.2 文庫構(gòu)建及上機(jī)測序
        3.2.3 數(shù)據(jù)處理及生物信息學(xué)分析
        3.2.4 qRT-PCR驗(yàn)證
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 原始測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制
        3.3.2 樣本重復(fù)相關(guān)性分析結(jié)果
        3.3.3 差異基因表達(dá)分析和聚類分析結(jié)果
        3.3.4 富集分析結(jié)果
        3.3.5 qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果
        3.3.6 篩選差異表達(dá)基因
    3.4 討論與小結(jié)
第4章 差異基因Slc5a8 在小鼠眼角膜的時空分布探究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)備與試劑配方
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 試劑配方
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 qRT-PCR
        4.2.2 單分子RNA原位檢測
        4.2.3 Western Blotting
        4.2.4 免疫組化
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 Slc5a8 在轉(zhuǎn)錄水平的定量與定位檢測
        4.3.2 SLC5A8 在蛋白水平的半定量與定位檢測
    4.4 討論與小結(jié)
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號：3795050