中國鹵蟲(Artemia sinica)在胚胎發(fā)育過程中,外界環(huán)境的變化能夠?qū)е轮袊u蟲胚胎產(chǎn)生滯育現(xiàn)象。在胚胎滯育和重啟動過程中,胚胎一方面需要修復(fù)其DNA損傷,另一方面需要調(diào)節(jié)細(xì)胞周期以調(diào)控胚胎的再啟動過程。當(dāng)外源或內(nèi)源DNA損傷因子攻擊細(xì)胞時,細(xì)胞周期檢查點相關(guān)蛋白RAD9(Cell cycle checkpoint control protein RAD9A)可參與細(xì)胞周期的阻滯延緩,同時,待細(xì)胞中受損DNA得到完善修復(fù)后再恢復(fù)細(xì)胞周期正常運轉(zhuǎn),以確保滯育胚胎能夠正常發(fā)育。RAD9還參與調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄、影響核苷酸合成、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和胚胎發(fā)育等細(xì)胞活動。目前,RAD9在中國鹵蟲滯育胚胎重啟動中的作用一直沒有研究,因此,本研究對進(jìn)一步分析中國鹵蟲胚胎滯育和滯育解除過程中RAD9對細(xì)胞周期的調(diào)控作用具有較為重要的理論意義。本文首次克隆了中國鹵蟲As-rad9基因cDNA全長,并對其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,采用實時定量PCR方法檢測As-rad9基因在中國鹵蟲胚胎發(fā)育各時期,溫度脅迫及鹽度脅迫條件下mRNA的表達(dá)水平及表達(dá)模式,利用免疫印跡技術(shù)檢測RAD9及其相關(guān)蛋白RAD17,H...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鹵蟲研究概況
        1.1.1 中國鹵蟲的形態(tài)學(xué)特征及地理分布
        1.1.2 鹵蟲的經(jīng)濟(jì)價值和分子生物學(xué)研究現(xiàn)狀
        1.1.3 鹵蟲胚胎滯育的研究
    1.2 細(xì)胞周期檢查點
        1.2.1 G1/S期檢驗點
        1.2.2 S期檢驗點
        1.2.3 G2/M期檢驗點
        1.2.4 S/M期檢驗點
        1.2.5 紡錘體組裝檢驗點
    1.3 細(xì)胞周期檢查點蛋白RAD9
    1.4 本研究的目的及意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要試劑及藥品
        2.1.3 儀器與設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 鹵蟲總RNA的提取
        2.2.2 基因全長序列的獲取
        2.2.3 PCR產(chǎn)物的純化和克隆轉(zhuǎn)菌
        2.2.4 熒光實時定量PCR
        2.2.5 原核表達(dá)
        2.2.6 大量誘導(dǎo)和包涵體純化
        2.2.7 Western Blot
        2.2.8 免疫熒光
        2.2.9 小RNA干擾
        2.2.10 生物信息學(xué)及生物統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 As-rad9 基因全長和生物信息學(xué)分析
    3.2 As-rad9 生物信息學(xué)分析
    3.3 As-RAD9 序列進(jìn)化關(guān)系分析
    3.4 As-rad9 熒光實時定量PCR實驗結(jié)果
    3.5 As-RAD9 重組蛋白的表達(dá)及純化
        3.5.1 As-RAD9 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.5.2 As-RAD9 重組蛋白的可溶性檢測
        3.5.3 As-RAD9 重組蛋白的純化
    3.6 As-RAD9 蛋白的表達(dá)模式
        3.6.1 在中國鹵蟲不同時期的表達(dá)
        3.6.2 在低溫脅迫下的表達(dá)
        3.6.3 在高鹽濃度脅迫下的表達(dá)
    3.7 As-RAD9 免疫熒光
    3.8 As-rad9的siRNA干擾實驗
4 討論
    4.1 As-rad9 基因全長和生物信息學(xué)分析
    4.2 As-RAD9 亞細(xì)胞定位分析
    4.3 As-RAD9 在中國鹵蟲不同發(fā)育時期的表達(dá)水平
    4.4 As-RAD9 在溫度和鹽度脅迫下的表達(dá)水平
    4.5 中國鹵蟲不同發(fā)育時期As-RAD9 的作用
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號：3794941