膜聯(lián)蛋白1（Anxa1）是一種鈣依賴(lài)的磷脂結(jié)合蛋白,在動(dòng)物、植物、微生物中均有表達(dá),參與多種細(xì)胞生理活動(dòng)。由于小鼠背部皮膚組織中Anxa1基因的表達(dá)隨著毛囊生長(zhǎng)周期的變化而變化,我們推測(cè)Anxa1可能是影響毛囊生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵因子。為了探究Anxa1基因?qū)π∈竺疑L(zhǎng)發(fā)育的影響,本研究通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)體系結(jié)合顯微注射技術(shù)制備Anxa1基因的敲除（knockout,KO）和過(guò)表達(dá)（overexpression,OE）小鼠;通過(guò)脫毛誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)比較小鼠背部毛發(fā)生長(zhǎng)的速度;通過(guò)組織切片的顯微觀察統(tǒng)計(jì)小鼠背部皮膚組織中毛囊的密度和直徑;通過(guò)纖維細(xì)度儀測(cè)量小鼠毛干的直徑。通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)小鼠毛囊中Ki-67、CD34的分布;通過(guò)qRT-PCR或Western Blot檢測(cè)小鼠背部皮膚組織中Egf、Notch1、Mkk7的表達(dá)水平;通過(guò)Western Blot檢測(cè)小鼠背部皮膚中Akt1、Erk1/2的磷酸化水平。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)體系結(jié)合顯微注射技術(shù)制備Anxa1 KO與OE小鼠,獲得4只KO小鼠和5只OE小鼠,陽(yáng)性率分別為為19.0%和20.8%。10周齡小鼠脫毛誘... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Anxa1過(guò)表達(dá)載體圖譜

張豪 Anxa1 基因敲除和過(guò)表達(dá)小鼠的制備及其對(duì)小鼠毛囊生長(zhǎng)影響的初步探究4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 F0代Anxa1 KO小鼠PCR鑒定結(jié)果本研究共移植顯微注射胚胎 541 枚，獲得 21 只仔鼠，對(duì)新生的 21 只仔鼠進(jìn)行 PCR 鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，編號(hào)分別為 77 號(hào)、79 號(hào)、81 號(hào)、83 號(hào)的 F0代小鼠所在泳道出現(xiàn) 300~500bp 目的條帶（圖 1.3），陽(yáng)性率為 19.0%。實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3 次所得結(jié)果一致，初步斷定獲得 4 只 F0代 KO 小鼠。

圖1.4 F0代Anxa1 KO小鼠的測(cè)序結(jié)果Figure 1.4 Sequencing results of Anxa1 KO mice in F0generation4.3 F0代Anxa1 OE小鼠PCR鑒定結(jié)果本研究共移植原核注射胚胎456枚，獲得24只仔鼠，對(duì)新生的24只小鼠進(jìn)行PCR反應(yīng)鑒定，電泳結(jié)果顯示5只F0代仔鼠所在泳道出現(xiàn)與預(yù)期大小相符的目的條帶（圖1.5），其編號(hào)分別為7號(hào)、11號(hào)、14號(hào)、17號(hào)和21號(hào)，陽(yáng)性率為20.8%。Anxa1 OE小鼠。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，所得結(jié)果一致，初步斷定獲得5只Anxa1 OE小鼠。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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