膜聯(lián)蛋白1（Anxa1）是一種鈣依賴的磷脂結合蛋白,在動物、植物、微生物中均有表達,參與多種細胞生理活動。由于小鼠背部皮膚組織中Anxa1基因的表達隨著毛囊生長周期的變化而變化,我們推測Anxa1可能是影響毛囊生長發(fā)育的關鍵因子。為了探究Anxa1基因對小鼠毛囊生長發(fā)育的影響,本研究通過CRISPR/Cas9技術體系結合顯微注射技術制備Anxa1基因的敲除（knockout,KO）和過表達（overexpression,OE）小鼠;通過脫毛誘導實驗比較小鼠背部毛發(fā)生長的速度;通過組織切片的顯微觀察統(tǒng)計小鼠背部皮膚組織中毛囊的密度和直徑;通過纖維細度儀測量小鼠毛干的直徑。通過免疫熒光染色檢測小鼠毛囊中Ki-67、CD34的分布;通過qRT-PCR或Western Blot檢測小鼠背部皮膚組織中Egf、Notch1、Mkk7的表達水平;通過Western Blot檢測小鼠背部皮膚中Akt1、Erk1/2的磷酸化水平。本研究利用CRISPR/Cas9技術體系結合顯微注射技術制備Anxa1 KO與OE小鼠,獲得4只KO小鼠和5只OE小鼠,陽性率分別為為19.0%和20.8%。10周齡小鼠脫毛誘... 

【文章來源】：內蒙古大學內蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Anxa1過表達載體圖譜

張豪 Anxa1 基因敲除和過表達小鼠的制備及其對小鼠毛囊生長影響的初步探究4 實驗結果4.1 F0代Anxa1 KO小鼠PCR鑒定結果本研究共移植顯微注射胚胎 541 枚，獲得 21 只仔鼠，對新生的 21 只仔鼠進行 PCR 鑒定，結果發(fā)現(xiàn)，編號分別為 77 號、79 號、81 號、83 號的 F0代小鼠所在泳道出現(xiàn) 300~500bp 目的條帶（圖 1.3），陽性率為 19.0%。實驗重復 3 次所得結果一致，初步斷定獲得 4 只 F0代 KO 小鼠。

圖1.4 F0代Anxa1 KO小鼠的測序結果Figure 1.4 Sequencing results of Anxa1 KO mice in F0generation4.3 F0代Anxa1 OE小鼠PCR鑒定結果本研究共移植原核注射胚胎456枚，獲得24只仔鼠，對新生的24只小鼠進行PCR反應鑒定，電泳結果顯示5只F0代仔鼠所在泳道出現(xiàn)與預期大小相符的目的條帶（圖1.5），其編號分別為7號、11號、14號、17號和21號，陽性率為20.8%。Anxa1 OE小鼠。實驗重復三次，所得結果一致，初步斷定獲得5只Anxa1 OE小鼠。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3228924