目的:探究miR-186-5p對小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化的影響及其潛在的分子機制。方法:qRT-PCR檢測miR-186-5p在不同周齡小鼠白色脂肪組織及3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化過程中的表達變化;通過脂質(zhì)體將miR-186-5p mimics、inhibitors轉(zhuǎn)染入增殖液或分化液培養(yǎng)的3T3-L1細(xì)胞后,利用CCK-8、EdU和qRT-PCR檢測3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖變化,油紅O染色觀察其脂滴形態(tài);通過生物信息軟件TargetScan和雙熒光報告系統(tǒng)分別對miR-186-5p靶基因進行預(yù)測和確認(rèn)。結(jié)果:（1） miR-186-5p在1～6周齡小鼠的白色脂肪組織及3T3-L1前脂肪細(xì)胞自然分化過程中表達量均逐漸上調(diào)。（2）與陰性對照相比,mimics或inhibitors轉(zhuǎn)染分別顯著地促進或抑制了miR-186-5p的表達。（3）過表達miR-186-5p后,3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖速率減慢,脂滴增大增多;而抑制miR-186-5p后,3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖速率增快,脂滴數(shù)量減少,且粒徑變小。其中過表達miR-186-5p顯著地降低了野生型Wnt5a和M... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2020,40(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

miR-186-5p在各組織、3T3-L1前脂肪細(xì)胞中的表達量

轉(zhuǎn)染和誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化8天后，油紅O染色顯示:與陰性對照組相比，過表達miR-186-5p組細(xì)胞分化明顯，形成紅色脂滴較多，而抑制miR-186-5p處理組細(xì)胞分化能力降低，紅色脂滴較少(圖3a)。甘油三酯含量檢測結(jié)果表明:相比于對照組，mimics組甘油三酯含量顯著增多，而inhibitors組甘油三酯含量減少(圖3b)。實時熒光定量結(jié)果與上述觀察相一致，即與陰性對照相比，過表達組的脂肪生成關(guān)鍵基因PPARγ、C/EBPα、a P2、FABP4、ELOVL6、LPL的表達量分別增加2.8倍、4.0倍、3.8倍、2.1倍、2.5倍、4.0倍，抑制劑處理組PPARγ、C/EBPα、aP2、ELOVL6、LPL的表達量分別減少了38.8%、49.7%、60.6%、44.4%、56.5%(圖3c)。綜上所述，miR-186-5p可在細(xì)胞水平上促進3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞。圖3 miR-186-5p對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響

miR-186-5p對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-130b靶向PPARγ抑制家兔前體脂肪細(xì)胞分化[J]. 何洪炳,蔡明成,梁小虎,賈先波,賴松家.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2017(11)
[2]miR-92a-3p對3T3-L1前體脂肪細(xì)胞增殖與分化的影響[J]. 張麗華,歐陽丹,徐立鳳,馬勇江,張媛,李玉谷.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2016(11)
[3]Hsa-miR-186在結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達及作用[J]. 陳芳,周暢,陸艷霞,袁理,彭皤莉,鄭林,李學(xué)農(nóng).  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2013(05)



本文編號：3228771