發(fā)布時間：2021-03-30 22:00

　　傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）是家禽產(chǎn)業(yè)中具有高度傳染性的一種病原體,易感染呼吸道,也可引起禽類腎臟和生殖道等疾病,給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。IBV變異率高且存在多種血清型,各血清型之間幾乎沒有交叉保護(hù)作用,給IBV的診斷和治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)。S1蛋白作為主要的結(jié)構(gòu)蛋白,負(fù)責(zé)病毒與宿主細(xì)胞膜的結(jié)合,能夠引起機(jī)體產(chǎn)生中和性抗體。因此,抗IBV M41 S1蛋白單克隆抗體（monoclonal antibody,m Ab）的制備和模擬表位的篩選,為IBV的檢測打下基礎(chǔ),并為分析S1蛋白抗原表位提供參考。本研究將IBV M41毒株接種雞胚進(jìn)行擴(kuò)繁,從而獲得含有病毒的尿囊液。經(jīng)提取病毒總RNA,RT-PCR方法擴(kuò)增選定的S1基因,構(gòu)建重組載體p ET-28a-S1并導(dǎo)入E.coli BL21（DE3）細(xì)胞中。誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物通過SDS-PAGE分析,重組S1蛋白主要以包涵體形式存在,分子量約為20 k Da。復(fù)性后的重組S1蛋白經(jīng)Western-blot驗(yàn)證可以與雞陽性血清發(fā)生反應(yīng),表明重組S1蛋白具有反應(yīng)原性。將重組S1蛋白作為免疫原免... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增S1基因

2IBVM41S1蛋白的表達(dá)、純化及鑒定24泳顯示，得到與預(yù)期大小相一致的條帶，如圖2.2所示，泳道2為陰性對照，3～5泳道有明顯的目的條帶，大小約為519bp。圖2.2pMD19-T-S1重組載體的鑒定Fig.2.2TheidentificationofpMD19-T-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2：NC；3～5：pMD19-T-S1重組載體Line1：Marker(DL2000)；Line2：NC；Line3～5：recombinantvectorpMD19-T-S12.3.3表達(dá)載體pET-28a-S1的構(gòu)建S1基因與pET-28a載體雙酶切并純化回收后進(jìn)行連接，再轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coliBL21（DE3）進(jìn)行培養(yǎng)。挑取單菌落，用T7通用引物進(jìn)行菌液PCR。經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳顯示目的條帶位置大約在750bp，如圖2.3所示，泳道2～4為不同的克隆，5泳道為陰性對照。圖2.3pET-28a-S1重組載體的鑒定Fig.2.3TheidentificationofpET-28a-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2～4：pET-28a-S1重組載體；5：NCLine1：Marker(DL2000)；Line2～4：recombinantvectorpET-28a-S1；Line5：NC

2IBVM41S1蛋白的表達(dá)、純化及鑒定24泳顯示，得到與預(yù)期大小相一致的條帶，如圖2.2所示，泳道2為陰性對照，3～5泳道有明顯的目的條帶，大小約為519bp。圖2.2pMD19-T-S1重組載體的鑒定Fig.2.2TheidentificationofpMD19-T-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2：NC；3～5：pMD19-T-S1重組載體Line1：Marker(DL2000)；Line2：NC；Line3～5：recombinantvectorpMD19-T-S12.3.3表達(dá)載體pET-28a-S1的構(gòu)建S1基因與pET-28a載體雙酶切并純化回收后進(jìn)行連接，再轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coliBL21（DE3）進(jìn)行培養(yǎng)。挑取單菌落，用T7通用引物進(jìn)行菌液PCR。經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳顯示目的條帶位置大約在750bp，如圖2.3所示，泳道2～4為不同的克隆，5泳道為陰性對照。圖2.3pET-28a-S1重組載體的鑒定Fig.2.3TheidentificationofpET-28a-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2～4：pET-28a-S1重組載體；5：NCLine1：Marker(DL2000)；Line2～4：recombinantvectorpET-28a-S1；Line5：NC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]雞傳染性支氣管炎病毒在雞腎上皮細(xì)胞中培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究[J]. 姜逸,周生,唐夢君,俞燕,程旭,沈欣悅,李建梅,高明燕.  中國家禽. 2016(10)
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博士論文
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碩士論文
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[4]抗IBV山西分離株單克隆抗體的制備與鑒定[D]. 王盼.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]禽傳染性支氣管炎病毒單克隆抗體的制備及其特性研究[D]. 王芳.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[6]雞傳染性支氣管炎免疫膠體金診斷試紙研究[D]. 蘇磊.西南大學(xué) 2008
[7]檢測雞傳染性支氣管炎病毒抗體的HI試驗(yàn)與ELISA相關(guān)性比較[D]. 竇文茂.揚(yáng)州大學(xué) 2008



本文編號：3110228