放線菌是多種生物活性天然產(chǎn)物的潛在來(lái)源,在微生物藥物開(kāi)發(fā)中具有重要的作用。海洋放線菌由于其特殊的生長(zhǎng)環(huán)境造成了與陸地放線菌不同的代謝途徑,能夠產(chǎn)生具有生物活性的天然產(chǎn)物,是天然藥用化合物的重要生產(chǎn)者。從不同海洋環(huán)境中篩選放線菌,并對(duì)其次級(jí)代謝產(chǎn)物分離提取尋找生物活性物質(zhì)具有重要意義。本文通過(guò)對(duì)日照海岸線海洋沉積物中放線菌的篩選,揭示了日照海岸線放線菌的分布、抑菌潛力及其多樣性。主要研究結(jié)果如下:(1)采用五種不同的篩選培養(yǎng)基以及五種不同的預(yù)處理方法進(jìn)行放線菌的篩選一共得到208株放線菌。牛津杯法被用來(lái)檢測(cè)抑菌活性,其中91株具有抑菌活性。35株對(duì)產(chǎn)氣桿菌(Aerobacter aerogenes)CGMCC 1.183有抑制作用,25株對(duì)變形桿菌(Proteus)CGMCC 1.491有抑制作用,17株對(duì)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC25923有抑制作用,9株對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)ATCC25922有抑制作用,2株對(duì)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CGMCC 1.15148有抑制作用,3株對(duì)黃曲霉(Aspergillus flavus)CGMCC 3.3950有抑制作用。然后,選取25株抗菌活性較好的菌株,以16S rRNA基因?yàn)榛A(chǔ),對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化研究,25株菌可以分為22個(gè)種,屬于三個(gè)不同的屬:鏈霉菌屬(18株),擬諾卡氏菌屬(4株)和糖單胞菌屬(3株)。(2)通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定了海洋灰略紅鏈霉菌(Streptomyces griseorubens)SSGRZ-F8菌株最佳發(fā)酵條件。在此實(shí)驗(yàn)中結(jié)果表明菌株SSGRZ-F8產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)時(shí)間為11天,最佳接種量為8%,最佳培養(yǎng)溫度為30℃,最佳初始pH為8。通過(guò)發(fā)酵條件的優(yōu)化,菌株SSGRZ-F8對(duì)金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣桿菌以及變形桿菌的抑菌圈直徑分別提高了8 mm、12 mm、7 mm。同時(shí)進(jìn)行了菌株所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)性質(zhì)的研究,發(fā)現(xiàn)抑菌活性物質(zhì)具有較好的酸堿穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、光照穩(wěn)定性以及遺傳穩(wěn)定性。(3)運(yùn)用葡聚糖凝膠LH-20柱層析、反向MPLC以及HPLC等分離方法從發(fā)酵液有機(jī)相中分離得到5個(gè)單體化合物。利用一維核磁、二維核磁以及LC-MS鑒定五個(gè)化合物分別為:化合物1[cyclo(L-Val-L-Pro)]、化合物2[cyclo(L-Pro-L-Leu)]、化合物3[cyclo(L-Pro-L-Tyr)]、化合物4(N-acetyltyramine)、化合物5[cyclo(L-Pro-L-Phe)]。運(yùn)用732陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、AB-8大孔樹(shù)脂以及葡聚糖凝膠G-25柱層析等分離方法從發(fā)酵液水相中得到復(fù)合物Z3.(4)對(duì)化合物1-5和復(fù)合物Z3進(jìn)行了生物活性的測(cè)定,結(jié)果表明化合物3對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、產(chǎn)氣桿菌的最小抑菌濃度分別是160μg/mL、120μg/mL、100μg/mL,化合物5對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、產(chǎn)氣桿菌的最小抑菌濃度分別是180μg/mL、150μg/mL、130μg/mL,復(fù)合物Z3對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、產(chǎn)氣桿菌的最小抑菌濃度分別是100μg/mL、30μg/mL、20μg/mL。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)化合物1、2、3、5能夠抑制A549細(xì)胞的侵襲與遷徙。
【學(xué)位單位】：曲阜師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q936
【部分圖文】：

以及海洋微生物等。圖 1-3 展示了來(lái)自于不同海洋生態(tài)環(huán)境中的天然產(chǎn)物數(shù)量，我看出在 1965-2007 年之間，來(lái)自于中國(guó)海洋生態(tài)環(huán)境的天然產(chǎn)物所占總數(shù)較多。尤入 2000 年以來(lái)，篩選到的天然產(chǎn)物數(shù)量呈指數(shù)型增長(zhǎng)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他海域生態(tài)環(huán)方面可以體現(xiàn)出中國(guó)對(duì)自己海洋環(huán)境中天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)力度加強(qiáng)，另一方面也體現(xiàn)海洋環(huán)境中蘊(yùn)藏著豐富的海洋天然產(chǎn)物資源[22]。

圖 1-2 不同分類來(lái)源的天然產(chǎn)物的數(shù)量分布（1965-2005 年以平均數(shù)表示）ig. 1-2 Distribution of marine natural products by phylum.The data for 1965 to 2005 have been comaveraged

圖 1-2 不同分類來(lái)源的天然產(chǎn)物的數(shù)量分布（1965-2005 年以平均數(shù)表示）g. 1-2 Distribution of marine natural products by phylum.The data for 1965 to 2005 have been compiled andaveraged

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