人促卵泡激素(human follicle stimulating hormone,hFSH)是人的垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成并分泌的一種糖蛋白類促性腺激素~([3])。其家族成員包括促黃體激素,甲狀腺激素,人絨毛膜促性腺激素等糖蛋白激素,它們都采用了與人促卵泡刺激素相類似的結(jié)構(gòu),即共享同樣的α-亞基,而β-亞基則隨著特異性的不同而不同。人促卵泡激素在人類生殖領(lǐng)域演著重要的角色,它負(fù)責(zé)調(diào)控人體的生長(zhǎng)、發(fā)育、青春期性成熟等相關(guān)的一系列的生理過程。在女性體內(nèi),人促卵泡激素可以促進(jìn)卵泡細(xì)胞的增生分化,并促進(jìn)卵巢生長(zhǎng)發(fā)育,最終刺激生殖細(xì)胞的成熟;在男性體內(nèi),人促卵泡激素的作用是促進(jìn)精子的成熟與形成。由此可見,人促卵泡激素在男女兩性體內(nèi)都是很重要的激素之一,如果正常女性人促卵泡激素分泌偏低,會(huì)導(dǎo)致卵子排出異常,從而引起月經(jīng)不調(diào)、卵泡發(fā)育不良、不排卵等一系列疾病,最終導(dǎo)致不孕不育的發(fā)生。對(duì)于促卵泡激素的補(bǔ)充劑,由于其來源不同可分為三大類,第一類是通過下丘腦垂體的提取而得到的FSH,簡(jiǎn)稱為垂體FSH;第二類是從更年期或絕經(jīng)期婦女尿液中提取出來而得倒的FSH,簡(jiǎn)稱為尿源FSH;第三類是通過重組基因技術(shù),將人促卵泡激素的α-和β-鏈的編碼序列插入真核高表達(dá)載體pON1。經(jīng)DNA序列分析,所獲得的α-和β-鏈的基因組DNA序列在去除內(nèi)含子序列以后推導(dǎo)的氨基酸序列,與天然的FSH的α-和β-鏈的氨基酸序列完全一致。再通過懸浮細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)得到的高純度FSH,簡(jiǎn)稱為重組人促卵泡激素(rhFSH)。這三類補(bǔ)充劑各有優(yōu)缺點(diǎn),其中垂體FSH產(chǎn)量低、價(jià)格高,一直不能大范圍的應(yīng)用于臨床;尿源FSH由于來源于不同人體,個(gè)體差異性大、雜質(zhì)較大,從而引起患者副作用較大且容易引發(fā)過敏等反應(yīng)一直困擾著醫(yī)生與患者;因此重組人促卵泡激素憑借著純度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)越來越受到患者們的青睞。目前,從國(guó)內(nèi)的重組人促卵泡激素需求上來看,產(chǎn)品主要以進(jìn)口為主。而國(guó)內(nèi)唯一的“金賽恒”重組人促卵泡激素在2015年上市銷售,打破了國(guó)內(nèi)患者對(duì)進(jìn)口藥品的依賴,降低了用藥成本,其產(chǎn)品質(zhì)量可靠,建立了藥典標(biāo)準(zhǔn)。但從產(chǎn)能上看,目前該工藝為每批30L培養(yǎng)規(guī)模,已不能夠滿足日益擴(kuò)大的市場(chǎng)需求。本課題主要通過對(duì)重組人促卵泡激素細(xì)胞培養(yǎng)工藝的研究,將每批30L規(guī)模培養(yǎng)工藝放大至每批200L培養(yǎng)規(guī)模,放大前后蛋白質(zhì)量一致,產(chǎn)能提高,滿足市場(chǎng)需求,降低生產(chǎn)成本,讓廣大的患者受益。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q813.11
【部分圖文】：

消耗速率越快。為了保證細(xì)胞的可持續(xù)生長(zhǎng)，因此放大實(shí)驗(yàn)不同工藝步驟均采用（0.4~0.6）×106cells/ml 作為接種密度較為合理。3.2 工藝放大實(shí)驗(yàn)根據(jù)工藝放大設(shè)計(jì)，對(duì)放大后的工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)，對(duì)比工藝放大前后的細(xì)胞密度、活力、葡萄糖、蛋白表達(dá)量及 IEF simple western 等參數(shù)，確定工藝放大設(shè)計(jì)的可行性。重組人促卵泡激素細(xì)胞培養(yǎng)工藝中，細(xì)胞復(fù)蘇、擴(kuò)增的目的是為細(xì)胞發(fā)酵培養(yǎng)出足夠數(shù)量的細(xì)胞，因此實(shí)驗(yàn)過程對(duì)于細(xì)胞復(fù)蘇與擴(kuò)增的數(shù)據(jù)不作對(duì)比。3.2.1 細(xì)胞密度對(duì)比曲線根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與原工藝對(duì)比細(xì)胞發(fā)酵過程中每天的細(xì)胞密度數(shù)據(jù)，結(jié)果如圖 3.2 所示。

通過對(duì)反應(yīng)器的對(duì)比可知前期 200L 不銹鋼反應(yīng)器的攪拌直徑較大，對(duì)細(xì)胞的剪切力較大，因此細(xì)胞適應(yīng)此環(huán)境需要一定的時(shí)間，而后期 5L 反應(yīng)器的攪拌速度較小，氣體交換不充分，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分布不均一，因此原工藝后期細(xì)胞密度上升受阻，而放大后工藝可避免此現(xiàn)象發(fā)生。3.2.2 細(xì)胞活力對(duì)比曲線根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與原工藝對(duì)比細(xì)胞發(fā)酵過程中每天的細(xì)胞活力數(shù)據(jù)，結(jié)果如圖 3.3 所示。

圖 3.4 葡萄糖含量對(duì)比根據(jù)圖中葡萄糖的含量分析，放大后的工藝葡萄糖消耗速率穩(wěn)定，培養(yǎng)基及葡萄糖能夠提供細(xì)胞足夠的營(yíng)養(yǎng)成分以及碳源、氮源等必要的氨基酸成分，殘留葡萄糖的濃度在歷史值中心，向上及向下可浮動(dòng)空間較大，對(duì)于工藝控制較為簡(jiǎn)便，不會(huì)因葡萄糖含量不足產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞的損傷。3.2.4 表達(dá)量對(duì)比曲線根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與原工藝對(duì)比細(xì)胞發(fā)酵過程中每天的蛋白表達(dá)量數(shù)據(jù)，結(jié)果如圖 3.5 所示。

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1 吳茜雅;楊軍;曾曉霞;吳淑卿;;重組人促卵泡激素與重組促卵泡素β在控制性超促排卵中的療效[J];廣東醫(yī)學(xué);2016年01期

2 程賓;楊化新;梁成罡;馮芳;;RP-HPLC測(cè)定重組人促卵泡激素中唾液酸含量[J];藥物分析雜志;2007年09期

3 王曼瑩,邱正榮;促卵泡激素生化特性研究的某些進(jìn)展[J];生殖與避孕;1985年01期

4 冀淑英;;國(guó)產(chǎn)尿促卵泡素和瑞士產(chǎn)人重組促卵泡激素治療不孕癥的臨床療效比較[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2015年19期

5 鄒岳奇,劉玉翠,閻靜輝,陳英珠;基體輔助的激光解吸附質(zhì)譜法測(cè)定豬促卵泡激素(pFSH)分子量[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);1999年04期

6 劉金釧;彭貴子;盧智俊;左聯(lián);;重組人促卵泡激素研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年03期

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本文編號(hào)：2814600