束縛-浸水應(yīng)激模型(Restraint Water-Immersion Stress,RWIS)是一種快速對(duì)大鼠心理和生理造成傷害的刺激模型。在這種應(yīng)激模型中,大鼠在短時(shí)間內(nèi)因受到刺激,體溫下降,胃腸功能紊亂,導(dǎo)致胃酸分泌增加和急性胃黏膜損傷。腸神經(jīng)系統(tǒng)是位于胃腸道壁中的神經(jīng)元、神經(jīng)遞質(zhì)和腸細(xì)胞組成的網(wǎng)絡(luò),控制和調(diào)節(jié)胃腸道中的平滑肌,黏膜上皮和血管效應(yīng)系統(tǒng),它的調(diào)節(jié)具有高度的自主性,因此也被稱為“腸腦”。經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室的早期研究發(fā)現(xiàn),大鼠在一定的應(yīng)激時(shí)間段內(nèi),隨著束縛-浸水的時(shí)間增長(zhǎng),下丘腦的室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)、視上核(supraoptic nucleus,SON)、孤束核(Solitary Nucleus,NTS)、迷走神經(jīng)背核(dorsal motor nucleus of the vagus,DMV)和腸道肌間神經(jīng)叢中Fos和GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)的表達(dá)水平顯著升高,我們推測(cè)束縛-浸水應(yīng)激造成胃黏膜損傷不只是涉及到腦干內(nèi)神經(jīng)元的過(guò)度活動(dòng)這種初級(jí)中樞機(jī)制~([75]),所以我們提出了“下丘腦-腦干-腸腦軸”環(huán)路參與了對(duì)應(yīng)激的調(diào)控。而促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin-Releasing Factor,CRF)作為下丘腦的室旁核、視上核釋放的非常重要的激素之一,已研究表明其參與了多種應(yīng)激(熱刺激、冷刺激、感染和毒物刺激)反應(yīng),但促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRF)及其受體是否參與了束縛-浸水應(yīng)激尚未見報(bào)道。因此,我們提出以下幾個(gè)問(wèn)題:1.CRF及其受體是否介導(dǎo)和參與了RWIS過(guò)程,并在RWIS中各時(shí)間段有何變化?2.側(cè)腦室注射CRF受體阻斷劑Astressin和CRF后,對(duì)孤束核及腸道內(nèi)的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞有何影響?3.CRF若參與束縛-浸水的過(guò)程,是通過(guò)哪條信號(hào)路徑起作用?為了解決上述問(wèn)題,我們實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:實(shí)驗(yàn)研究一:大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(RWIS 0h)和應(yīng)激組(RWIS 1h,RWIS 2h,RWIS3h)后,采用免疫組化和免疫印跡法檢測(cè)大鼠CRF及其受體表達(dá)的影響,以探討CRF及其受體是否參與了RWIS過(guò)程。實(shí)驗(yàn)研究二:將大鼠分為對(duì)照組(側(cè)腦室注射生理鹽水)、CRF組(側(cè)腦室注射CRF)和Astressin組(側(cè)腦室注射CRF-R抑制劑Astressin),大鼠束縛-浸水應(yīng)激1h后,免疫組化和免疫印跡法檢測(cè)NTS、DMV以及腸神經(jīng)系統(tǒng)中Fos、GFAP、p-ERK1/2、NOS表達(dá),探討CRF在束縛浸水過(guò)程中的作用?實(shí)驗(yàn)研究三:將大鼠分為對(duì)照組(側(cè)腦室注射生理鹽水)、CRF組(側(cè)腦室注射CRF)和PD98059+CRF組(側(cè)腦室注射p-ERK1/2特異性抑制劑PD98059和CRF),大鼠束縛-浸水應(yīng)激1h后,免疫組化和免疫印跡法檢測(cè)NTS和DMV內(nèi)Fos和星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物GFAP表達(dá)的變化,探究CRF參與束縛-浸水的信號(hào)途徑?實(shí)驗(yàn)研究四:將大鼠分為對(duì)照組(側(cè)腦室注射生理鹽水)、CRF組和Astressin組,大鼠束縛-浸水應(yīng)激1h后,免疫組化和免疫印跡法檢測(cè)腸神經(jīng)系統(tǒng)中的Claudin-1、Occludin和胃黏膜中的MUC5AC表達(dá)變化,探究CRF對(duì)胃腸道功能的影響?實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠腦干迷走復(fù)合體內(nèi)CRF-R1與腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)CRF的表達(dá)明顯增加,且呈時(shí)間依賴性,在3h達(dá)到了最高。而與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠迷走復(fù)合體內(nèi)CRF-R2的表達(dá)明顯降低,且呈時(shí)間依賴性,在3h達(dá)到了最低。表明腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)CRF及腦干(NTS、DMV)內(nèi)CRF-R1被激活,參與了RWIS過(guò)程。2.與側(cè)腦室注射生理鹽水對(duì)照組相比,側(cè)腦室注射CRF-R抑制劑Astressin,束縛-浸水應(yīng)激1h后,實(shí)驗(yàn)組NTS、DMV以及腸神經(jīng)系統(tǒng)中的Fos表達(dá)、星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP、p-ERK1/2、NOS表達(dá)都顯著降低。而側(cè)腦室注射CRF,束縛-浸水應(yīng)激1h后,實(shí)驗(yàn)組NTS、DMV以及腸神經(jīng)系統(tǒng)中的Fos表達(dá)、星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP、p-ERK1/2、NOS表達(dá)都顯著升高,表明促腎上腺激素釋放激素可能激活了腦干和腸神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)一氧化氮能神經(jīng)元參與了在束縛-浸水應(yīng)激過(guò)程。3.與側(cè)腦室注射CRF對(duì)照組相比,側(cè)腦室注射p-ERK1/2特異性抑制劑PD98059和CRF后,實(shí)驗(yàn)組NTS、DMV以及腸神經(jīng)系統(tǒng)中的Fos和星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物GFAP表達(dá)明顯下降,表明CRF可能通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路參與束縛-浸水過(guò)程。4.與側(cè)腦室注射生理鹽水對(duì)照組相比,側(cè)腦室注射CRF組腸神經(jīng)系統(tǒng)中的Claudin-1、Occludin和胃黏膜中的MUC5AC表達(dá)顯著降低。表明束縛-浸水對(duì)大鼠造成胃機(jī)能的損傷和機(jī)體內(nèi)部發(fā)生了紊亂,而CRF在這個(gè)過(guò)程中可能加速了炎癥反應(yīng)和胃潰瘍,而且這個(gè)過(guò)程主要是通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控的。實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:1、腦干內(nèi)的CRF受體CRF-R和結(jié)腸內(nèi)的CRF都參與了束縛浸水應(yīng)激的過(guò)程。2、CRF主要是通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路對(duì)束縛浸水后造成的胃腸機(jī)能紊亂進(jìn)行調(diào)控的。
【學(xué)位單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q42
【部分圖文】：

圖 1 下丘腦和腦干對(duì)胃機(jī)能的調(diào)控示意圖[121]CRF 及其受體 CRF 及其受體的結(jié)構(gòu)、分布與功能特征促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（Corticotropin-Releasing Factor，CRF ；在嚙齒類中稱orticotropin-Releasing Hormone，CRH）是由 41 個(gè)氨基酸組成的神經(jīng)肽，它是作為重要的神經(jīng)內(nèi)分泌肽在下丘腦中第一個(gè)被提取到的。分泌 CRF 的神經(jīng)元主要位于腦的室旁核（PVN）、視上核（SON），但在海馬、杏仁核、紋狀體、藍(lán)斑和背縫腦區(qū)也有 CRF 的分布，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明這些部位與情緒情感有關(guān)[9]。CRF 和 CRF 相關(guān)肽發(fā)揮其生物學(xué)作用是通過(guò)與受體（CRF-R）結(jié)合起作用的。普為其受體分為兩種，即 CRF-R1（Corticotropin-Releasing Factor type 1）、CRF-R2orticotropin-Releasing Factor receptor type2）。這兩種受體都是屬于 II 型 G 蛋白偶聯(lián)

圖 2 MAPK 信號(hào)傳導(dǎo)途徑，由 ERK，JNK，p-38 和 ERK5 組成，其中每一種主要包括MKKK，MKK 和 MAPK 三級(jí)蛋白激酶。5.2 ERK 家族成員胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）是 MAPK 家族的一個(gè)非常重要的一員，它的信號(hào)傳遞途徑是涉及調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育及分裂的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的核心�，F(xiàn)在已知 ERK 家族有 5 個(gè)亞族，包括 ERK1、ERK2、ERK3、ERK4、ERK5。而分子量為 44kD 和 45kD 的 ERK1 和 ERK2 途徑是現(xiàn)在 ERK 家族中被研究最深入的，它們表達(dá)廣泛，涉及調(diào)節(jié)在不同細(xì)胞內(nèi)的重要生理活動(dòng)，比如減數(shù)分裂、有絲分裂等一系列生理過(guò)程[51-53]。而當(dāng)機(jī)體受到超過(guò)自身承受范圍的應(yīng)激時(shí)會(huì)導(dǎo)致 ERK1/2 信號(hào)通路的激活。5.3 ERK1/2 信號(hào)通路在應(yīng)激反應(yīng)中的調(diào)控

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文動(dòng)物山東大學(xué)動(dòng)物中心，Wistar 雄性大鼠，體重 230g 。飼養(yǎng) 3 天左右（適應(yīng)環(huán)境后進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。-浸水應(yīng)激模型的建立前一天，對(duì)大鼠禁食但可以使其自由飲水。束縛-浸水模型的制備：），用異氟烷輕微麻醉大鼠，迅速用醫(yī)用膠帶將大鼠四肢固定于自制木固定大鼠的牙齒，防止清醒后頭部扭動(dòng)。待大鼠清醒后將其放到冷水劍突與水位持平，見圖（1-1），對(duì)大鼠進(jìn)行束縛-浸水應(yīng)激。為了避激反應(yīng)的影響，因此將大鼠的 RWIS 時(shí)間選在上午進(jìn)行。

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1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達(dá)柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐s鉈

本文編號(hào)：2810593