阿魏酸(FA)是一種可再生的酚類(lèi)芳香化合物,廣泛存在于當(dāng)歸、阿魏、升麻等中草藥中。FA分子中的酚羥基和C=C結(jié)構(gòu)使其具有普遍的生物活性和藥理作用,可用于抗血栓、抗衰老、抗腫瘤、提高人體免疫力等方面,但其烷烴基較短,脂溶性不佳,難以透過(guò)生物膜中的脂溶性雙分子層,限制了其生物活性和復(fù)雜食品體系中的應(yīng)用。因此本文為了提高阿魏酸的親脂性,通過(guò)化學(xué)法和生物法,利用脂肪醇對(duì)FA進(jìn)行共價(jià)修飾,提高其親脂性及生物活性,拓寬其在食品體系中的應(yīng)用范圍,特別是富含油脂類(lèi)的食品體系中。首先,采用化學(xué)法(Knoevenagel法)和生物法(脂肪酶催化法),制備了阿魏酸己酯(FAC6),并通過(guò)硅膠柱色譜分離法對(duì)FAC6進(jìn)行分離純化,再結(jié)合核磁共振(1H-NMR、13C-NMR)、二級(jí)質(zhì)譜(MS2)與紅外光譜(IR)技術(shù)對(duì)FAC6進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征與鑒定。其次,研究了 FAC6對(duì)常見(jiàn)食源性致病菌單增李斯特菌(L.monocytogenes)的抑菌活性。FAC6對(duì)L.monocytogenes 的 MIC 值為0.1mM,MBC值為0.4mM;通過(guò)FAC6對(duì)L.monocytoge es的時(shí)間-殺滅動(dòng)力曲線(xiàn)與生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定分析,發(fā)現(xiàn)FAC6的抑制作用具有濃度和時(shí)間依賴(lài)性,且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),L.monocytogenes的自溶活性逐漸增強(qiáng)。進(jìn)一步對(duì)FAC6對(duì)L.monocytogenes抑菌的亞細(xì)胞機(jī)理進(jìn)行了探討,即通過(guò)FAC6對(duì)L.monocytogenes細(xì)胞膜的影響、膜蛋白的影響、與DAN的相互作用三個(gè)方面進(jìn)行了研究。對(duì)細(xì)胞膜的影響,PI攝取量和胞內(nèi)大分子蛋白質(zhì)、核酸的泄漏量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,FAC6顯著改變了L.monocytogenes細(xì)胞膜的完整性和通透性;FAC6預(yù)處理使細(xì)胞膜表面ζ-電位表現(xiàn)出超極化現(xiàn)象;通過(guò)掃描電子顯微鏡(SEM)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)FAC6作用后的L.monocytogenes細(xì)胞壁局部消失、細(xì)胞膜表面形成孔洞,細(xì)胞裂解;觀(guān)察透射電子顯微鏡(TEM)圖可發(fā)現(xiàn)FAC6作用后的細(xì)胞表面出現(xiàn)破裂,細(xì)胞內(nèi)部細(xì)胞質(zhì)流失。以上系列結(jié)果說(shuō)明,表明FAC6使L.monocytogenes的細(xì)胞膜受到了損傷。對(duì)蛋白質(zhì)的影響,FAC6與L.monocytogenes膜蛋白作用6 h后,在SDS-PAGE電泳圖中發(fā)現(xiàn)其蛋白條帶出現(xiàn)顏色變淺、加深、甚至部分條帶消失以及新條帶生成的現(xiàn)象,表明FAC6對(duì)膜蛋白的成份產(chǎn)生了影響;在熒光光譜分析中發(fā)現(xiàn)FAC6對(duì)細(xì)胞膜表面的苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)殘基具有猝滅作用,并伴隨紅移現(xiàn)象,說(shuō)明FAC6使氨基酸殘基的微環(huán)境更加親水,改變了膜蛋白的構(gòu)象。在DNA分子水平上,FAC6與基因組DNA相互作用(采用紫外-可見(jiàn)吸收光譜法、熒光光譜分析、熔點(diǎn)(Tm)值和分子對(duì)接(molecular docking))的研究結(jié)果表明FAC6與DNA是通過(guò)凹槽模式結(jié)合作用的。最后,測(cè)定了 0.1 mM FAC6在鱘魚(yú)魚(yú)子醬貯藏過(guò)程中對(duì)接種L.monocytogenes菌落總數(shù)的影響,結(jié)果表明FAC6能顯著抑制貯藏過(guò)程中鱷魚(yú)魚(yú)子醬中L.monocytogenes的生長(zhǎng),延長(zhǎng)魚(yú)子醬的貨架儲(chǔ)存期。
【學(xué)位單位】：浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：TS201.3
【部分圖文】：

圖１－３研究路線(xiàn)逡逑Ｆｉｇ．邋１－３邋Ｒｅｓｅａｒｃｈ邋ｒｏｕｔｅ逡逑

ＴＬＣ分離純化的重點(diǎn)在于配制合適比例的展開(kāi)劑，通過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道和預(yù)實(shí)驗(yàn)逡逑的摸索，展開(kāi)劑的配比確定為ＰＥ／ＥＡ＝４：１邋（Ｖ／Ｖ）。ＦＡＣ６的薄層色譜分離結(jié)果如逡逑圖２－４所示。其中圖（Ａ）為磷鉬酸顯色，Ｌｉｎｅ邋１是丙二酸半酯的粗產(chǎn)物點(diǎn)樣，Ｌｉｎｅ逡逑２是丙二酸半酯粗產(chǎn)物與己醇點(diǎn)樣的交叉點(diǎn)，Ｌｉｎｅ邋３是己醇點(diǎn)樣，圖中Ｌｉｎｅ邋１箭逡逑頭指示的目標(biāo)產(chǎn)物丙二酸半酯上方并未出現(xiàn)己醇的點(diǎn)，表示己醇己完全反應(yīng)。圖逡逑（Ｂ）為碘顯色，Ｌｉｎｅ邋１是ＦＡＣ６的粗產(chǎn)物點(diǎn)樣，Ｌｉｎｅ邋２是ＦＡＣ６的粗產(chǎn)物與反應(yīng)物逡逑香草醛的交叉點(diǎn)樣，Ｌｉｎｅ３是反應(yīng)物香草醛點(diǎn)樣，從圖中Ｌｉｎｅ邋１可知，箭頭指示逡逑的目標(biāo)產(chǎn)物ＦＡＣ６下方還有微量香草醛未反應(yīng)完。并且在Ｌｉｎｅ邋１邋ＦＡＣ６點(diǎn)的上方逡逑應(yīng)該是兩個(gè)雜質(zhì)點(diǎn)，一個(gè)是圖中明顯觀(guān)察到的雜質(zhì)點(diǎn)（靠近硅膠板上方邊緣），逡逑另一個(gè)是緊鄰著ＦＡＣ６上方的雜質(zhì)點(diǎn)，由于ＦＡＣ６產(chǎn)率高，ＦＡＣ６的點(diǎn)濃且大，逡逑而緊鄰的雜質(zhì)點(diǎn)濃度非常的低，通過(guò)碘顯色，基本觀(guān)察不到�？紤]到其他雜質(zhì)點(diǎn)逡逑與ＦＡＥｓ在此展開(kāi)劑條件下分離效果明顯

ＴＬＣ分離純化的重點(diǎn)在于配制合適比例的展開(kāi)劑，通過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道和預(yù)實(shí)驗(yàn)逡逑的摸索，展開(kāi)劑的配比確定為ＰＥ／ＥＡ＝４：１邋（Ｖ／Ｖ）。ＦＡＣ６的薄層色譜分離結(jié)果如逡逑圖２－４所示。其中圖（Ａ）為磷鉬酸顯色，Ｌｉｎｅ邋１是丙二酸半酯的粗產(chǎn)物點(diǎn)樣，Ｌｉｎｅ逡逑２是丙二酸半酯粗產(chǎn)物與己醇點(diǎn)樣的交叉點(diǎn)，Ｌｉｎｅ邋３是己醇點(diǎn)樣，圖中Ｌｉｎｅ邋１箭逡逑頭指示的目標(biāo)產(chǎn)物丙二酸半酯上方并未出現(xiàn)己醇的點(diǎn)，表示己醇己完全反應(yīng)。圖逡逑（Ｂ）為碘顯色，Ｌｉｎｅ邋１是ＦＡＣ６的粗產(chǎn)物點(diǎn)樣，Ｌｉｎｅ邋２是ＦＡＣ６的粗產(chǎn)物與反應(yīng)物逡逑香草醛的交叉點(diǎn)樣，Ｌｉｎｅ３是反應(yīng)物香草醛點(diǎn)樣，從圖中Ｌｉｎｅ邋１可知，箭頭指示逡逑的目標(biāo)產(chǎn)物ＦＡＣ６下方還有微量香草醛未反應(yīng)完。并且在Ｌｉｎｅ邋１邋ＦＡＣ６點(diǎn)的上方逡逑應(yīng)該是兩個(gè)雜質(zhì)點(diǎn)，一個(gè)是圖中明顯觀(guān)察到的雜質(zhì)點(diǎn)（靠近硅膠板上方邊緣），逡逑另一個(gè)是緊鄰著ＦＡＣ６上方的雜質(zhì)點(diǎn)，由于ＦＡＣ６產(chǎn)率高，ＦＡＣ６的點(diǎn)濃且大，逡逑而緊鄰的雜質(zhì)點(diǎn)濃度非常的低，通過(guò)碘顯色，基本觀(guān)察不到�？紤]到其他雜質(zhì)點(diǎn)逡逑與ＦＡＥｓ在此展開(kāi)劑條件下分離效果明顯

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本文編號(hào)：2810368