【摘要】：細胞內的谷胱甘肽濃度為0-1OmM,而細胞能夠容忍的最大探針濃度為10μM。因此,要實現對細胞內谷胱甘肽定量檢測的目標就需要探針與谷胱甘肽的反應必須是可逆的。邁克爾加成反應一種快速平衡的反應,當邁克爾加成反應的給體為巰基時尤為如此。基于活潑雙鍵與巰基的邁克爾加成反應來設計谷胱甘肽可逆探針的關鍵是構筑反應活性適度的活潑雙鍵,而活潑雙鍵的構筑要以Kd值為指標,才能滿足實際檢測時對探針的要求,能夠應用于實際體內檢測谷胱甘肽的探針Kd值應3 mM。目前,能夠定量檢測谷胱甘肽的探針僅有三例,但這三種探針的Kd值并不是很接近于3 mM,因此探針的結構還有必要進一步優(yōu)化而使Kd≈3mM。本文以Kd值微調為目標,采用遠距離調控邁克爾逆反應中間體穩(wěn)定性的策略,設計了目標分子。完成了四種探針分子的合成與表征并探討了遠距離調控基團與Kd值的關系。結果顯示基團為嗎啉的探針QG-d各項性能最優(yōu)。即響應時間短、最低檢出限低(4.4 μM)且Kd=3.26 mM。探針QG-d的Kd值是目前報道文獻中最接近最佳值的一個。此外,嗎啉基團還有一個功能是溶酶體的定位性,探針QG-d可用于對溶酶體內谷胱甘肽定量檢測,為進一步了解溶酶體內的生理過程提供良好的基礎。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：O657.3;Q516
【圖文】：

一種是還原型的谷胱甘肽（ＧＳＨ）邋［２７？］。在生物體內氧化型谷胱甘肽逡逑（ＧＳＳＧ）與還原型的谷胱甘肽（ＧＳＨ）的比值大概在１：３０－１：１００之間［１３］。逡逑生物體內的兩種形態(tài)的谷胱甘肽是可以相互轉換的，如圖１．２所示，谷逡逑胱甘肽中的巰基在還原酶的催化下兩兩相互結合形成二硫鍵生成氧化型逡逑谷胱甘肽，在這一過程中同時伴隨著生物體內過氧化氫和水之間的相互逡逑轉換［３６４］。氧化型谷胱甘肽中的二硫鍵也會在氧化物酶的催化下氧化為逡逑巰基生成還原型谷胱甘肽，在這一過程中還伴隨著輔酶ＮＡＤＰＨ和ＮＡＤＰ逡逑之間的的轉換。通過兩種形式谷胱甘肽之間的相互轉換維持著生物體內逡逑的氧化還原平衡［４１＿４２］。當細胞內的谷胱甘肽濃度異常時，就會使細胞內逡逑氧化物質和還原物質的濃度發(fā)生改變，最終引起細胞內一系列的氧化還逡逑原應激反應，對細胞造成不可逆轉的損傷［４３４４］。逡逑ＮＡＤＰ邋＾邐＾邋２ＧＳＨ邋＇邐Ｈ２０２逡逑ＸＸ逡逑ＮＡＤＰＨ邐ＧＳＳＨ邐、Ｈ２０逡逑圖１．２谷胱甘肽與氧化應激逡逑１．２谷胱甘肽熒光探針研究進展逡逑在２０１４年，Ｊｕｙｏｕｎｇ邋Ｙｏｏｎ課題組開發(fā)了能夠對細胞和小鼠組織中的逡逑谷胱甘肽進行定性檢測的熒光探針［１７］。探針主要以花菁染料為熒光團，逡逑其本身具有很弱的熒光

Ｗａｖｅｔｅｏｇｔｔｔ邋ｉ邋ｎｍ邐Ｔｕｒｎ！邋ｎｔｎ逡逑圖１．３探針的結構和光譜性質逡逑２０１７年，Ｌｉｎｇｘｉｎ邋Ｃｈｅ帶領他的團隊開發(fā)了一種能夠對谷胱甘肽進逡逑行檢測的近紅外比率型熒光探針Ｃｙｏ－ＤｉＳｅ［２（）］。在外界條件的刺激下，細逡逑胞內的谷胱甘肽濃度會發(fā)生改變，探針Ｃｙｏ－Ｄｉｓｅ利用硫硒交換反應對高逡逑溫和低溫狀態(tài)下細胞內谷胱甘肽濃度的變化進行了檢測。并且發(fā)現在短逡逑時間的低溫或高溫狀態(tài)下，細胞內的谷胱甘肽濃度有所升高起到了一定逡逑的抗凋亡作用。逡逑ＲｅｓｆＭＨｓｅ邋ａｎＨ：逡逑／。邐二NB一：一，、．逡逑ｆ邋ＵＪ邋Ｊ邋一．Ｈ邐Ｓ邋＿１．．．．．一邋ｌ邐；逡逑：－ｖ邋ｊ逡逑‘邋０邐‘逡逑Ｒ邐｜逡逑Ｔａｒｇｅｔ邋ｕｎｉｔ．＊邐ｅｙｃ＾ｖｉ＊邐＾逡逑Ｎ邋？0０？逡逑ＨＯ逡逑ｄ—二邋＿逡逑＾％ｏ￣￣邋￣￣ｍ７邐ｒ？￣邐＂ａｓｃ邐ＭＯ邋６１０＇邐＜ｂＪ￣＇邋Ｍ－？邋ｅ＊ｃ逡逑？？＊＞｝邐Ｗ＾？？ｔｅｎ＾？ｓ邐＆Ｋ８Ｉ｝逡逑圖１．４探針Ｃｙｏ－Ｄｉｓｅ結構及光譜性質逡逑Ｈａｅ－Ｊｏ邋Ｋｉｍ帶領他的團隊開發(fā)了一種能夠對線粒體內的谷胱甘肽進逡逑行檢測的開關型熒光探針Ｍｉｔ0ＧＰ［２３］。探針以菁染料為熒光團，引入偶逡逑３逡逑

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本文編號：2719440