產(chǎn)酶溶桿菌屬黃單胞科,溶桿菌屬,是一種在環(huán)境中廣泛存在的新型植物病害生防細(xì)菌。而HSAF(Heat-Stable Antifungal Factor)是其產(chǎn)生的一種小分子抗菌物質(zhì),其能夠?qū)Χ喾N真菌和卵菌產(chǎn)生抑制作用,在生物防治中發(fā)揮著重要作用,是一種結(jié)構(gòu)和作用方式全新的廣譜抗真菌、卵菌活性物質(zhì)。生產(chǎn)無(wú)農(nóng)藥殘留、無(wú)病蟲危害的農(nóng)業(yè)產(chǎn)品一直是促進(jìn)人類自身健康和保護(hù)生態(tài)環(huán)境的重要途徑,也是生物防治藥物研究領(lǐng)域的主要目標(biāo)。而HSAF作為一種環(huán)境友好型殺菌劑,具有開發(fā)為新型生物源農(nóng)藥的巨大潛力。然而現(xiàn)階段HSAF的產(chǎn)量太低,無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn),一定程度上制約了其在病害防治中的廣泛應(yīng)用和推廣。因此獲得HSAF高產(chǎn)菌株,提高HSAF產(chǎn)量是當(dāng)前亟需解決的問(wèn)題。本研究以HSAF為研究對(duì)象,以產(chǎn)酶溶桿菌OH11為出發(fā)菌株,采用三種方法進(jìn)行HSAF高產(chǎn)菌株的選育。通過(guò)紫外誘變、HSAF負(fù)調(diào)控基因的敲除、HSAF生物合成基因及其正調(diào)控基因的啟動(dòng)子改造,構(gòu)建了多個(gè)不同的突變菌株,并對(duì)其HSAF產(chǎn)量進(jìn)行評(píng)估。通過(guò)紫外誘變,篩選到3株HSAF高產(chǎn)菌株,其HSAF產(chǎn)量與野生型相比分別提高了 36%、33%和25%...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 產(chǎn)酶溶桿菌研究進(jìn)展
        1.1.1 產(chǎn)酶溶桿菌的分類
        1.1.2 產(chǎn)酶溶桿菌的生物學(xué)特征
        1.1.3 產(chǎn)酶溶桿菌的生防作用
        1.1.4 胞外水解酶
        1.1.5 WAP-8294A
        1.1.6 熱穩(wěn)定抗真菌因子HSAF
        1.1.7 HSAF生物合成的遺傳調(diào)控
    1.2 微生物高產(chǎn)菌株選育策略
        1.2.1 誘變育種
        1.2.2 核糖體工程
        1.2.3 代謝工程
        1.2.4 基因組改組技術(shù)
    1.3 本研究的目的意義與主要研究?jī)?nèi)容
        1.3.1 本研究的目的與意義
        1.3.2 主要研究?jī)?nèi)容
第2章 紫外誘變選育HSAF高產(chǎn)菌株
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.3.2 致死率曲線的測(cè)定
        2.3.3 HSAF高產(chǎn)菌株的篩選
        2.3.4 遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
    2.4 小結(jié)與討論
第3章 敲除負(fù)調(diào)控基因選育HSAF高產(chǎn)菌株
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 三個(gè)HSAF負(fù)調(diào)控基因的調(diào)控作用驗(yàn)證
        3.3.2 雙突變菌株敲除突變體的構(gòu)建
        3.3.3 雙突變菌株的HSAF產(chǎn)量評(píng)估
        3.3.4 三突變菌株敲除突變體的構(gòu)建
        3.3.5 三突變菌株的HSAF產(chǎn)量評(píng)估
    3.4 小結(jié)與討論
第4章 HSAF合成基因及其正調(diào)控基因的啟動(dòng)子改造選育HSAF高產(chǎn)菌株
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 將強(qiáng)啟動(dòng)子插入HSAF合成基因啟動(dòng)子之前
        4.3.2 用強(qiáng)啟動(dòng)子替換HSAF合成基因啟動(dòng)子
        4.3.3 用強(qiáng)啟動(dòng)子替換HSAF正調(diào)控基因啟動(dòng)子
    4.4 小結(jié)與討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果
致謝



本文編號(hào)：3780986