胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）作為治療Ⅱ型糖尿病的重要靶點之一,相對傳統(tǒng)藥物,具有不易引起低血糖等優(yōu)點。但由于天然GLP-1體內(nèi)循環(huán)時間短,使用受限。因此,GLP-1長效受體激動劑的開發(fā)已成為國內(nèi)外研究熱點�，F(xiàn)有修飾GLP-1的合成聚合物（如PEG、PLGA）,雖然可以有效改善GLP-1的藥動學(xué)與藥效學(xué),但這些聚合物的長期使用容易引發(fā)不良的免疫原性反應(yīng)。兩性離子多肽具有優(yōu)秀的抗蛋白質(zhì)非特異性吸附（nonfouling）功能,獨(dú)特的體內(nèi)酶降解能力和正常代謝的優(yōu)勢。為了實現(xiàn)GLP-1類似物更加平穩(wěn)的體內(nèi)緩釋,優(yōu)秀的血液循環(huán)能力,提高藥效和生物利用度,避免不良的免疫原性反應(yīng),本工作設(shè)計了聚谷氨酸-賴氨酸兩性離子多肽（poly（EK））修飾的GLP-1衍生物（poly（EK）-Lira）,并對其結(jié)構(gòu)特征、體外活性、體內(nèi)藥效、藥代動力學(xué)及免疫原性等進(jìn)行考察。本文主要包括以下幾個部分:（1）以Nα-（δ-芐基-L-谷氨酰）-Nε-芐氧羰基-L-賴氨酸為單體,以HOBt和EDC·HCl為縮合劑,以N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸為封端劑,進(jìn)行聚合后脫保護(hù),得到半胱氨酸封端的兩性離子多肽（... 

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【學(xué)位級別】：碩士

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致謝
摘要
Abstract
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第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 GLP-1與Ⅱ型糖尿病
        1.2.1 II型糖尿病概述
        1.2.2 GLP-1及其生理學(xué)作用
        1.2.3 GLP-1受體激動劑的發(fā)展
        1.2.4 利拉魯肽概述
    1.3 兩性離子多肽及其應(yīng)用
        1.3.1 兩性離子多肽概述
        1.3.2 抗蛋白質(zhì)非特異性吸附及其機(jī)理
        1.3.3 兩性離子多肽的應(yīng)用
    1.4 本課題的提出及主要工作
第2章 兩性離子多肽poly(EK)修飾的GLP-1衍生物的制備與表征
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗儀器設(shè)備
        2.2.3 poly(EK)的合成
            2.2.3.1 EK dimer (with boc)的合成
            2.2.3.2 EK dimer (without boc)的合成
            2.2.3.3 poly(EK)的合成
        2.2.4 Lira-MA的合成
        2.2.5 poly(EK)-Lira和PEG-Lira的合成
        2.2.6 Cy5.5-poly(EK)-Lira的合成
        2.2.7 表征及性能分析
            2.2.7.1 核磁共振譜儀(~1H NMR)
            2.2.7.2 凝膠滲透色譜儀GPC
            2.2.7.3 poly(EK)與Lira-MA反應(yīng)效率測定
            2.2.7.4 動態(tài)光散射(DLS)
            2.2.7.5 臨界膠束濃度(CMC)測定
            2.2.7.6 圓二色光譜(CD)測定多肽二級結(jié)構(gòu)
            2.2.7.7 透射電子顯微鏡(TEM)
    2.3 結(jié)果及討論
        2.3.1 EK dimer (with boc), EK dimer (without boc),poly(EK), Lira-MA的核磁表征
        2.3.2 poly(EK),poly(EK)-Lira的GPC表征
        2.3.3 poly(EK)與Lira-MA反應(yīng)效率計算
        2.3.4 poly(EK)-Lira膠束表征
        2.3.5 多肽二級結(jié)構(gòu)分析
    2.4 本章小結(jié)
第3章 兩性離子多肽poly(EK)修飾的GLP-1衍生物的體外活性研究
    3.1 引言
    3.2 poly(EK)-Lira對INS1細(xì)胞增殖作用的研究
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗儀器設(shè)備
        3.2.3 實驗操作
        3.2.4 實驗結(jié)果與結(jié)論
    3.3 poly(EK)-Lira對促進(jìn)INS1細(xì)胞胰島素分泌的研究
        3.3.1 實驗材料
        3.3.2 實驗儀器設(shè)備
        3.3.3 實驗操作
        3.3.4 實驗結(jié)果與討論
    3.4 本章小結(jié)
第4章 兩性離子多肽poly(EK)修飾的GLP-1衍生物的體內(nèi)活性研究
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗儀器設(shè)備
        4.2.3 Ⅱ型糖尿病SD大鼠的模型建立
        4.2.4 poly(EK)-Lira體內(nèi)血糖控制能力測定
        4.2.5 poly(EK)-Lira體內(nèi)血藥濃度測定
        4.2.6 Cy5.5-poly(EK)-Lira在注射部位滯留情況研究
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 影響SD大鼠成功造模的關(guān)鍵因素分析
        4.3.2 poly(EK)-Lira體內(nèi)血糖控制效果與分析
        4.3.3 poly(EK)-Lira體內(nèi)血藥濃度測定結(jié)果與分析
        4.3.4 Cy5.5-poly(EK)-Lira在注射部位滯留情況的觀察與分析
    4.4 本章小結(jié)
第5章 兩性離子多肽poly(EK)修飾的GLP-1衍生物的體內(nèi)免疫原性研究
    5.1 引言
    5.2 實驗部分
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗儀器設(shè)備
        5.2.3 poly(EK)-Lira在大鼠注射部位的免疫原性研究
        5.2.4 poly(EK)-Lira在大鼠體內(nèi)的免疫原性研究
    5.3 實驗結(jié)果與分析
        5.3.1 poly(EK)-Lira皮下注射部位染色切片的觀察與分析
        5.3.2 SD大鼠血生化、血常規(guī)結(jié)果分析
        5.3.3 SD大鼠血清中抗poly(EK)抗體的測定結(jié)果與分析
    5.4 本章小結(jié)
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)及臟體比正常值范圍探討[J]. 蔣中仁,徐薇,金偉,王睿,劉科亮,謝惠萍,盧潤生.  預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志. 2011(10)
[2]SD大鼠血常規(guī)指標(biāo)正常參考值范圍探討[J]. 劉科亮,王林,王睿,敬明武,葛宇杰,劉以農(nóng),陳瓊瑤,謝惠萍.  預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志. 2009(09)



本文編號：3721365