絲素是蠶合成與分泌的天然蛋白質(zhì),包括家蠶絲素和野蠶（天蠶、柞蠶、栗蠶和大山蠶等）絲素。目前的研究主要集中在家蠶絲素的應(yīng)用,研究發(fā)現(xiàn),家蠶絲素不僅具有出色的機(jī)械性能和生物可降解性,并且其制備的材料能夠很好的支持細(xì)胞的粘附、鋪展、增殖,還有利于干細(xì)胞的分化等。然而對野蠶絲素（天蠶和柞蠶）的研究涉及略少。但是在天蠶絲素和柞蠶絲素分子中分布著高度重復(fù)的RGD序列,RGD短肽作為整合素與配體蛋白的相互作用的識別位點,使整合素與配體結(jié)合后,把胞外信號傳入細(xì)胞內(nèi),激發(fā)細(xì)胞相應(yīng)的功能。但并不是含RGD序列的肽段都具有促進(jìn)細(xì)胞粘附生長等生物功能,所以明確野蠶絲素中含RGD的序列是否具有類似于細(xì)胞外基質(zhì)中RGD的功能,這對于拓展野蠶絲素作為生物材料的應(yīng)用至關(guān)重要。另外,有研究顯示,RGD中任何一個氨基酸的取代將會影響其生物活性,所以揭示野蠶絲素含RGD肽段側(cè)基基團(tuán)的完整性是否對細(xì)胞有不同的作用,這也是至關(guān)重要的。因此,本文采用大腸桿菌表達(dá)了重組克隆的含RGD短肽基因的序列,對其側(cè)基羧基進(jìn)行保護(hù)與再釋放,研究這段含有RGD短肽序列及其側(cè)基羧基對細(xì)胞粘附增殖的影響。本文完成的主要工作有以下幾個方面:（1）將本... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 野蠶絲素蛋白的結(jié)構(gòu)與組成
        1.1.1 天蠶絲素蛋白的組成與結(jié)構(gòu)
        1.1.2 柞蠶絲素蛋白的組成與結(jié)構(gòu)
    1.2 野蠶絲蛋白的應(yīng)用
    1.3 RGD三肽序列的功能及應(yīng)用
    1.4 重組絲蛋白的研究
    1.5 本文主要研究目的及內(nèi)容
第二章 野蠶絲素蛋白含RGD肽段的制備
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 主要試劑與緩沖液的制備
        2.2.4 實驗方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 目的肽段表達(dá)載體p GEX-AY4的構(gòu)建示意圖
        2.3.2 目的肽段大量表達(dá)的流程圖
        2.3.3 菌細(xì)胞總蛋白的SDS-PAGE圖
        2.3.4 目的肽段的SDS-PAGE和質(zhì)譜圖
    2.4 本章小結(jié)
第三章 目的肽段（-RGD-）_4羧基保護(hù)/脫保護(hù)及其鑒定
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 主要試劑的配制
        3.2.4 實驗方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 目的肽段（-RGD-）_4側(cè)基羧基保護(hù)前后鑒定
        3.3.2 接枝后絲素蛋白膜的鑒定
        3.3.3 絲素蛋白膜上（-RGD-）_4接枝能力分析
        3.3.4 肽段（-RGD-）_4在絲素蛋白膜上的分布
    3.4 本章小結(jié)
第四章 目的肽段（-RGD-）_4對細(xì)胞粘附與增殖的影響
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 主要試劑的配制
        4.2.4 實驗方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 細(xì)胞粘附率分析
        4.3.2 細(xì)胞增殖分析
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)語
    5.1 全文結(jié)論
    5.2 全文的主要研究成果
    5.3 本文的不足及今后的研究計劃
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間本人公開發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]不同條件制備的血管樣蠶絲編織物小口徑管狀支架及其形態(tài)結(jié)構(gòu)與細(xì)胞毒性測定[J]. 殷音,郝云霞,劉志武,魏雅麗,王建南.  蠶業(yè)科學(xué). 2015(02)
[3]大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng):第3代細(xì)胞增殖快純度高[J]. 曾智謀,范忠誠,張壽,劉亦恒,吳多慶,王琮仁.  中國組織工程研究. 2014(50)
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[9]RGD肽修飾的純鈦種植材料表面成骨細(xì)胞黏附增殖能力[J]. 陳奕帆,黃元瑾,宋光保,萬乾炳,王劍,楊曉喻,巢永烈.  實用口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2010(01)
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碩士論文
[1]水蛭素改性絲素蛋白抗凝血材料的制備及其性能研究[D]. 王瓊玉.蘇州大學(xué) 2017
[2]RGD肽型陽離子類脂的合成及基因轉(zhuǎn)運性能研究[D]. 劉天龍.遼寧師范大學(xué) 2015
[3]野蠶絲素含RGD肽段的制備及其細(xì)胞粘附、增殖性能的研究[D]. 趙煥榮.蘇州大學(xué) 2015
[4]絲素蛋白管狀支架制備及其水蛭素改性研究[D]. 魏雅麗.蘇州大學(xué) 2014
[5]重組野蠶絲素含RGD肽段的制備與表征[D]. 楊云星.蘇州大學(xué) 2013
[6]再生絲素蛋白結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變的研究[D]. 熊思勇.蘇州大學(xué) 2010



本文編號：3656689