【摘要】：基于蛋白質(zhì)材料的納米級微球與合成聚合物材料相比具有天然優(yōu)勢,在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域有非常廣泛的應(yīng)用。白蛋白納米微球已經(jīng)顯示出在藥物遞送中的巨大潛能。傳統(tǒng)的構(gòu)建白蛋白納米微球的方法主要是通過去溶劑化法,但存在有毒性試劑殘留、粒徑控制較難以及蛋白質(zhì)失活等不足。因此,開發(fā)新型溫和、簡易并且粒徑可控的制備全蛋白納米載體的策略在臨床癌癥治療中具有非常重要的意義。本論文開發(fā)了一種通過酪氨酸殘基光氧化還原的交聯(lián)方法用于制備全蛋白質(zhì)納米微球。該方法反應(yīng)條件溫和、不需有機試劑添加,反應(yīng)速度快可達幾分鐘,得到的白蛋白納米微球單分散性好,形貌規(guī)則,粒徑可控,可以最大程度保持蛋白的生物活性。本論文研究內(nèi)容包括以下幾個方面:(1)通過一步光催化交聯(lián)法在可見光照射和生理條件下成功制備了人免疫球蛋白抗體IgG和牛血清白蛋白BSA的納米級微球及水凝膠,只需幾分鐘便可實現(xiàn)納米微球在20-100 nm尺度的精準(zhǔn)調(diào)控。制備的BSA NPs球形形態(tài)規(guī)整、單分散性好,蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)并未發(fā)生明顯變化。同時BSA NPs具有良好的生物相容性和穩(wěn)定性。該方法得到的人IgG水凝膠經(jīng)流變測試表明其彈性模量和損失模量可達500 Pa和50 Pa,該方法為構(gòu)建全蛋白納米微球及水凝膠提供了一種新策略。(2)開發(fā)了一種綠色的構(gòu)建白蛋白納米載藥體系的方法。利用光催化交聯(lián)法制得的BSA NPs通過靜電吸附和疏水相互作用將抗癌藥物分子阿霉素包埋,在藥載比為1:10的條件下可以得到粒徑為35 nm的載藥納米微球DOX/BSA NPs,Zeta電位為-12.5±0.6mV,包封率和載藥量分別為70.7±1.2%和6.3±0.1%。體外模擬釋放實驗表明DOX/BSA NPs具備緩釋效果,pH 7.4和pH 5.0下20 h內(nèi)的最大釋放量分別可達40%和60%,并在10 mM的DTT還原條件下加速釋放。利用共聚焦顯微鏡觀察MCF-7細胞對DOX/BSA NPs的攝取及定位,結(jié)果顯示隨著孵育時間的延長,細胞對DOX/BSA NPs的內(nèi)吞作用增強。細胞毒性實驗結(jié)果顯示DOX/BSA NPs進入癌細胞后具備有效的細胞殺傷作用并且可以最大程度保留藥物活性。(3)探究光催化交聯(lián)法制備eGFP納米微球并保持其生物活性的可行性。成功制備了粒度為20 nm,熒光活性可保持40%的eGFP NPs,其穩(wěn)定性和二級結(jié)構(gòu)保持良好并且沒有明顯的毒性。細胞攝取實驗結(jié)果顯示eGFP NPs可以通過內(nèi)吞方式進入細胞質(zhì)并保持熒光活性,利用BSA與eGFP共混交聯(lián)發(fā)現(xiàn)可以增強細胞對納米粒子的攝取。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ460.4;TB383.1

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本文編號：2741882