【摘要】：為了提高抗癌藥物在體內(nèi)的抑瘤效果,增加藥物的靶向遞送效率,達(dá)到更好的抗腫瘤作用。本課題設(shè)計(jì)了中藥單體蟾毒靈(具有優(yōu)異抗腫瘤作用)和尼達(dá)尼布(新型多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑)聯(lián)合給藥策略。為了改善藥物溶解度較低及副作用較大的問(wèn)題,提高藥物靶向遞送效果,以多級(jí)修飾白蛋白(兼具靶向性和協(xié)同抑瘤作用)為材料通過(guò)同軸靜電噴霧技術(shù)構(gòu)建了新型給藥系統(tǒng)。我們期待通過(guò)這種復(fù)方給藥策略及新型的制劑技術(shù)的應(yīng)用,能夠更有效的發(fā)揮藥物抗腫瘤效果,減少毒副作用,為抗腫瘤治療提供指導(dǎo)和借鑒意義。具體內(nèi)容如下。一、綜述本部分首先對(duì)中藥單體蟾毒靈(Bufalin,BF)和尼達(dá)尼布(Nintedanib,NDNB)在抗腫瘤方面的研究進(jìn)展,及聯(lián)合給藥策略進(jìn)行介紹;其次對(duì)白蛋白載體在藥物傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用進(jìn)行簡(jiǎn)單敘述,闡述雙胍基基團(tuán)和熊去氧膽酸基團(tuán)(Ursodeoxycholic Acid,UA)在抗腫瘤方面的特性,最后對(duì)新型的微納米粒子制備技術(shù)-同軸靜電噴霧技術(shù)的特點(diǎn)與應(yīng)用進(jìn)行介紹。二、處方前研究本部分建立了高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定BF和NDNB藥物濃度,兩種藥物檢測(cè)專屬性良好,在1-25μg/mL的濃度下檢測(cè)符合線性要求。BF的定量限和檢測(cè)限分別為75ng/mL和25 ng/mL;NDNB的定量限和檢測(cè)限分別為110 ng/mL和40 ng/mL。其它方法學(xué)項(xiàng)下檢查項(xiàng)目均符合要求。BF在pH7.4 PBS和pH7.4 PBS(0.1%吐溫80)溶液中平衡溶解度分別為42.03±1.34μg/mL和876.77±2.71μg/mL,NDNB在pH7.4 PBS和pH7.4 PBS(0.1%吐溫80)溶液中平衡溶解度分別為4.89±0.88μg/mL和95.03±1.06μg/mL。藥物在不同濃度(1,10和25μg/mL)和幾種介質(zhì)(乙醇、pH7.4 PBS、pH7.4 PBS(0.1%吐溫80)和pH7.4 PBS(0.1%吐溫80,0.5%血清))中分析時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定性符合要求。三、雙胍基-熊去氧膽酸基團(tuán)雙修飾牛血清白蛋白的制備及其性質(zhì)考察本部分首先合成了對(duì)雙胍基苯甲酸(Para-biguanidinyl benzoyl acid,DP),并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行表征。后通過(guò)碳二亞胺法使用UA和DP對(duì)牛血清白蛋白(Bovine albumin,BSA)進(jìn)行修飾,制備各修飾蛋白UA-BSA、DP-BSA和DP-UA-BSA,通過(guò)熒光光譜和紫外光譜對(duì)小分子DP和UA對(duì)BSA相互作用做定性考察,表明了小分子對(duì)白蛋白的成功修飾。采用熒光胺法和質(zhì)譜法測(cè)定UA-BSA中UA修飾度分別為10.68和8.56,兩者結(jié)果基本一致;另外通過(guò)質(zhì)譜法測(cè)定DP-BSA和DP-UA-BSA中DP的修飾度分別為38.15和29.15,進(jìn)一步證明修飾蛋白的成功制備。最后通過(guò)MTT法對(duì)修飾蛋白進(jìn)行安全性評(píng)價(jià),各修飾蛋白在50-500μg/mL濃度范圍內(nèi)生物相容性良好。四、同軸靜電噴霧技術(shù)制備載藥白蛋白微粒及其體外性質(zhì)考察本部分首先采用單軸靜電噴霧技術(shù)成功制備白蛋白微球,粒徑大小均一,在300nm-900 nm之間。后采用同軸靜電噴霧技術(shù)制備載藥白蛋白微粒,經(jīng)單因素考察和中心復(fù)合設(shè)計(jì)優(yōu)化處方工藝制備載藥白蛋白微粒。表征結(jié)果表明:粒徑分布均一,大小為879±56nm,電位為-5.86±1.12 mV。BF和NDNB的包封率分別為78.0%和76.2%,載藥量分別為1.57%和2.20%。SEM、TEM和LSCM表征表明:載藥白蛋白微粒中微球形態(tài)和核殼結(jié)構(gòu)良好。經(jīng)XRD圖譜結(jié)果表明微粒中BF和NDNB無(wú)定型存在。體外釋放結(jié)果表明,BF和NDNB在載藥白蛋白微粒中的釋放速率相比原料藥明顯減緩,且加入血清前后制劑組中藥物溶出釋放行為基本一致,穩(wěn)定性良好。五、復(fù)方多修飾白蛋白微粒體外抑瘤效果、靶向效果及作用機(jī)制探討本部分通過(guò)MTT法考察發(fā)現(xiàn),各種微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞(HepG2細(xì)胞)抑制效果比較如下:復(fù)方多修飾白蛋白微粒復(fù)方單修飾白蛋白微粒復(fù)方未修飾白蛋白微粒單藥物多修飾白蛋白微粒原料藥。經(jīng)計(jì)算得給藥系統(tǒng)中BF和NDNB的組合指數(shù)CI小于1,表明BF和NDNB對(duì)HepG2細(xì)胞抑制發(fā)揮協(xié)同作用。各修飾蛋白載藥微粒中藥物IC_(50)變化趨勢(shì)表明雙修飾蛋白材料制備的微粒對(duì)HepG2細(xì)胞抑制具有雙重促進(jìn)作用。通過(guò)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明UA能促進(jìn)HepG2細(xì)胞對(duì)白蛋白微粒的攝取效率。六、體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)、組織分布學(xué)與藥效學(xué)研究本部分首先建立了BF和NDNB的體內(nèi)分析方法,并對(duì)該方法的方法學(xué)進(jìn)行考察,結(jié)果表明均符合測(cè)定要求。體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)結(jié)果表明,復(fù)方多修飾白蛋白微粒(BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs)中BF的消除半衰期從0.526 h增加到2.948 h,藥物在體內(nèi)的平均滯留時(shí)間(MRT)也從1.224 h變?yōu)?.154 h;NDNB消除半衰期從1.733 h增加到4.130 h,藥物在體內(nèi)的平均滯留時(shí)間(MRT)也從2.064 h變?yōu)?.384 h。表明BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs具有明顯的緩釋效果。通過(guò)活體成像技術(shù)對(duì)復(fù)方多修飾白蛋白微粒的靶向性進(jìn)行評(píng)價(jià),并通過(guò)離體組織考察微粒在小鼠體內(nèi)的分布。由活體成像和離體組織分布結(jié)果可以看出,復(fù)方多修飾白蛋白微粒組經(jīng)尾靜脈注射吸收后與未修飾制劑組相比,在腫瘤部位攝取顯著提高,具有良好的主動(dòng)靶向效果。藥效學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果表明制備的BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs具有最強(qiáng)的抗腫瘤作用,BF和NDNB兩種藥物聯(lián)合使用可提高制劑的抗腫瘤效果,且多修飾載體可通過(guò)DP自身抑瘤作用和UA主動(dòng)靶向作用發(fā)揮雙重抗腫瘤作用,增強(qiáng)抗腫瘤效果。表明BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs能減少原料藥的心臟毒性,對(duì)各器官無(wú)明顯毒性,安全性良好。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TQ460.1
【圖文】：

濃度溶液中的穩(wěn)定性蟾毒靈和尼達(dá)尼布母液若干，用流動(dòng)相稀釋至 1、10 和 25 μg/m、8、12、24、48 和 72 h 測(cè)定藥物濃度（n=3），計(jì)算 RSD 值（介質(zhì)中的穩(wěn)定性靈和尼達(dá)尼布母液若干，分別用乙醇、pH 7.4 PBS、pH 7.4 PBS（0S（0.1% Tween80，0.5% serum）不同介質(zhì)稀釋至濃度為 5 μg/ml的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣，記錄藥物濃度大小變化，計(jì)算 RSD 值（%）。果與討論長(zhǎng)的確定圖 2.1 所示，蟾毒靈和尼達(dá)尼布分別在 302 nm 和 391 nm 處有最大靈和尼達(dá)尼布的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為 302 nm 和 391 nm。

色譜圖（A：流動(dòng)相溶液，B：空白輔料溶液，C：蟾毒靈溶液，D：空白輔料和混合溶液，E：空白輔料和尼達(dá)尼布蟾毒靈的混合溶液，F(xiàn)：樣品溶液）C Chromatogram (A: Blank solvent solution, B: Blank excipient solution, C: Bufalin soxcipient and bufalin solution, E: Mixture of excipient, nintedanib and bufalin solution, Fsolution )尼布專屬性考察.3 中 ABCDEF 譜圖結(jié)果分析可知：尼達(dá)尼布出峰時(shí)間為 12.5 min。藥物擾，尼達(dá)尼布檢測(cè)專屬性良好。

【參考文獻(xiàn)】

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1 金紹娣;姚成;蔡照勝;;對(duì)雙胍基苯甲酸鹽酸鹽的制備及其合成條件優(yōu)化[J];化學(xué)世界;2010年04期

2 張寧;汪晨;顧偉;凌昌全;;蟾毒靈對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞周期的影響及其機(jī)制研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2010年03期

3 梁重陽(yáng);徐蔚青;曹焱鑫;劉立俠;張淑芹;劉志屹;李泓睿;李柏志;孫非;;FITC標(biāo)記重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLz-8)在NB4細(xì)胞中的動(dòng)態(tài)定位[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2009年03期

4 汲宏磊;�？∑�;姜艷芳;于雷;;新型肝靶向一氧化氮供體藥物對(duì)肝硬化門靜脈高壓血流動(dòng)力學(xué)的實(shí)驗(yàn)性研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2008年03期

5 張良珂;侯世祥;毛聲俊;魏大鵬;宋相容;;受體介導(dǎo)米托蒽醌白蛋白納米粒腫瘤細(xì)胞靶向性研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

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本文編號(hào)：2736373