【摘要】：為了提高抗癌藥物在體內的抑瘤效果,增加藥物的靶向遞送效率,達到更好的抗腫瘤作用。本課題設計了中藥單體蟾毒靈(具有優(yōu)異抗腫瘤作用)和尼達尼布(新型多靶點酪氨酸激酶抑制劑)聯(lián)合給藥策略。為了改善藥物溶解度較低及副作用較大的問題,提高藥物靶向遞送效果,以多級修飾白蛋白(兼具靶向性和協(xié)同抑瘤作用)為材料通過同軸靜電噴霧技術構建了新型給藥系統(tǒng)。我們期待通過這種復方給藥策略及新型的制劑技術的應用,能夠更有效的發(fā)揮藥物抗腫瘤效果,減少毒副作用,為抗腫瘤治療提供指導和借鑒意義。具體內容如下。一、綜述本部分首先對中藥單體蟾毒靈(Bufalin,BF)和尼達尼布(Nintedanib,NDNB)在抗腫瘤方面的研究進展,及聯(lián)合給藥策略進行介紹;其次對白蛋白載體在藥物傳遞系統(tǒng)中的應用進行簡單敘述,闡述雙胍基基團和熊去氧膽酸基團(Ursodeoxycholic Acid,UA)在抗腫瘤方面的特性,最后對新型的微納米粒子制備技術-同軸靜電噴霧技術的特點與應用進行介紹。二、處方前研究本部分建立了高效液相色譜法(HPLC)測定BF和NDNB藥物濃度,兩種藥物檢測專屬性良好,在1-25μg/mL的濃度下檢測符合線性要求。BF的定量限和檢測限分別為75ng/mL和25 ng/mL;NDNB的定量限和檢測限分別為110 ng/mL和40 ng/mL。其它方法學項下檢查項目均符合要求。BF在pH7.4 PBS和pH7.4 PBS(0.1%吐溫80)溶液中平衡溶解度分別為42.03±1.34μg/mL和876.77±2.71μg/mL,NDNB在pH7.4 PBS和pH7.4 PBS(0.1%吐溫80)溶液中平衡溶解度分別為4.89±0.88μg/mL和95.03±1.06μg/mL。藥物在不同濃度(1,10和25μg/mL)和幾種介質(乙醇、pH7.4 PBS、pH7.4 PBS(0.1%吐溫80)和pH7.4 PBS(0.1%吐溫80,0.5%血清))中分析時間內穩(wěn)定性符合要求。三、雙胍基-熊去氧膽酸基團雙修飾牛血清白蛋白的制備及其性質考察本部分首先合成了對雙胍基苯甲酸(Para-biguanidinyl benzoyl acid,DP),并對其結果進行表征。后通過碳二亞胺法使用UA和DP對牛血清白蛋白(Bovine albumin,BSA)進行修飾,制備各修飾蛋白UA-BSA、DP-BSA和DP-UA-BSA,通過熒光光譜和紫外光譜對小分子DP和UA對BSA相互作用做定性考察,表明了小分子對白蛋白的成功修飾。采用熒光胺法和質譜法測定UA-BSA中UA修飾度分別為10.68和8.56,兩者結果基本一致;另外通過質譜法測定DP-BSA和DP-UA-BSA中DP的修飾度分別為38.15和29.15,進一步證明修飾蛋白的成功制備。最后通過MTT法對修飾蛋白進行安全性評價,各修飾蛋白在50-500μg/mL濃度范圍內生物相容性良好。四、同軸靜電噴霧技術制備載藥白蛋白微粒及其體外性質考察本部分首先采用單軸靜電噴霧技術成功制備白蛋白微球,粒徑大小均一,在300nm-900 nm之間。后采用同軸靜電噴霧技術制備載藥白蛋白微粒,經單因素考察和中心復合設計優(yōu)化處方工藝制備載藥白蛋白微粒。表征結果表明:粒徑分布均一,大小為879±56nm,電位為-5.86±1.12 mV。BF和NDNB的包封率分別為78.0%和76.2%,載藥量分別為1.57%和2.20%。SEM、TEM和LSCM表征表明:載藥白蛋白微粒中微球形態(tài)和核殼結構良好。經XRD圖譜結果表明微粒中BF和NDNB無定型存在。體外釋放結果表明,BF和NDNB在載藥白蛋白微粒中的釋放速率相比原料藥明顯減緩,且加入血清前后制劑組中藥物溶出釋放行為基本一致,穩(wěn)定性良好。五、復方多修飾白蛋白微粒體外抑瘤效果、靶向效果及作用機制探討本部分通過MTT法考察發(fā)現(xiàn),各種微粒對腫瘤細胞(HepG2細胞)抑制效果比較如下:復方多修飾白蛋白微粒復方單修飾白蛋白微粒復方未修飾白蛋白微粒單藥物多修飾白蛋白微粒原料藥。經計算得給藥系統(tǒng)中BF和NDNB的組合指數(shù)CI小于1,表明BF和NDNB對HepG2細胞抑制發(fā)揮協(xié)同作用。各修飾蛋白載藥微粒中藥物IC_(50)變化趨勢表明雙修飾蛋白材料制備的微粒對HepG2細胞抑制具有雙重促進作用。通過細胞攝取實驗表明UA能促進HepG2細胞對白蛋白微粒的攝取效率。六、體內藥物動力學、組織分布學與藥效學研究本部分首先建立了BF和NDNB的體內分析方法,并對該方法的方法學進行考察,結果表明均符合測定要求。體內藥動學結果表明,復方多修飾白蛋白微粒(BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs)中BF的消除半衰期從0.526 h增加到2.948 h,藥物在體內的平均滯留時間(MRT)也從1.224 h變?yōu)?.154 h;NDNB消除半衰期從1.733 h增加到4.130 h,藥物在體內的平均滯留時間(MRT)也從2.064 h變?yōu)?.384 h。表明BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs具有明顯的緩釋效果。通過活體成像技術對復方多修飾白蛋白微粒的靶向性進行評價,并通過離體組織考察微粒在小鼠體內的分布。由活體成像和離體組織分布結果可以看出,復方多修飾白蛋白微粒組經尾靜脈注射吸收后與未修飾制劑組相比,在腫瘤部位攝取顯著提高,具有良好的主動靶向效果。藥效學評價結果表明制備的BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs具有最強的抗腫瘤作用,BF和NDNB兩種藥物聯(lián)合使用可提高制劑的抗腫瘤效果,且多修飾載體可通過DP自身抑瘤作用和UA主動靶向作用發(fā)揮雙重抗腫瘤作用,增強抗腫瘤效果。表明BF-NDNB-DP-UA-BSA NPs能減少原料藥的心臟毒性,對各器官無明顯毒性,安全性良好。
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TQ460.1
【圖文】：

濃度溶液中的穩(wěn)定性蟾毒靈和尼達尼布母液若干，用流動相稀釋至 1、10 和 25 μg/m、8、12、24、48 和 72 h 測定藥物濃度（n=3），計算 RSD 值（介質中的穩(wěn)定性靈和尼達尼布母液若干，分別用乙醇、pH 7.4 PBS、pH 7.4 PBS（0S（0.1% Tween80，0.5% serum）不同介質稀釋至濃度為 5 μg/ml的時間點進樣，記錄藥物濃度大小變化，計算 RSD 值（%）。果與討論長的確定圖 2.1 所示，蟾毒靈和尼達尼布分別在 302 nm 和 391 nm 處有最大靈和尼達尼布的檢測波長分別為 302 nm 和 391 nm。

色譜圖（A：流動相溶液，B：空白輔料溶液，C：蟾毒靈溶液，D：空白輔料和混合溶液，E：空白輔料和尼達尼布蟾毒靈的混合溶液，F(xiàn)：樣品溶液）C Chromatogram (A: Blank solvent solution, B: Blank excipient solution, C: Bufalin soxcipient and bufalin solution, E: Mixture of excipient, nintedanib and bufalin solution, Fsolution )尼布專屬性考察.3 中 ABCDEF 譜圖結果分析可知：尼達尼布出峰時間為 12.5 min。藥物擾，尼達尼布檢測專屬性良好。

【參考文獻】

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本文編號：2736373