【摘要】：磷脂酶(phospholipase)是一類(lèi)可以將水化磷脂水解成為脂肪酸和水化磷脂的酶,在醫(yī)藥,食品、化工等眾多行業(yè)都具有重要應(yīng)用。本文從土壤中篩選出磷脂酶產(chǎn)生菌并進(jìn)行了鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化、酶的分離純化、酶的基本性質(zhì)等相關(guān)的研究,最后對(duì)該酶的催化產(chǎn)物進(jìn)行了表征。本課題首先從土壤中篩選出磷脂酶產(chǎn)生菌B8,經(jīng)形態(tài)觀察和18S r DNA測(cè)序鑒定為黑曲霉。對(duì)該菌株產(chǎn)生磷脂酶的發(fā)酵條件經(jīng)初步優(yōu)化,確定為:1.5%麥芽糖,0.5%卵磷脂,1%酵母粉,0.05%Na H2PO4·2H2O,0.10%K2HPO4·3H2O,0.06%Mg SO4·7H2O,0.05%Ca Cl2,初始p H為6.5,最適溫度30℃,轉(zhuǎn)速220 r/min,培養(yǎng)時(shí)間4天。對(duì)黑曲霉B8發(fā)酵液進(jìn)行分離純化得到磷脂酶,SDS-PAGE電泳表明該酶蛋白的分子量約為40 k Da。該酶的酶學(xué)性質(zhì)為:最適溫度為30℃,最適p H為6.5,最合適的底物為卵磷脂,Ca2+和Mg2+對(duì)該酶有一定的促進(jìn)作用,SDS和EDTA對(duì)該酶有較強(qiáng)的抑制作用。利用該磷脂酶以卵磷脂為底物進(jìn)行催化反應(yīng),轉(zhuǎn)化率為40%左右,對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行簡(jiǎn)單分離純化和初步表征,表明催化產(chǎn)物為甘油磷酸膽堿。
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：TQ925
【圖文】：

圖 1.2 不同磷脂酶的作用位點(diǎn)[19]Figure1.2 The catalytic mechanism of phospholipases on phosphatidyleho磷脂酶 A1（phospholipaseA1）作用于 Sn-1 位的脂肪酸使之水解-酰基溶血性磷脂，該溶血性磷脂上 Sn-2 位的脂肪酸能夠轉(zhuǎn)移至 S被水解[20]，所以會(huì)有部分磷脂可被磷脂酶 A1 完全水解。磷脂酶專(zhuān)一性步槍不強(qiáng)，兼具有一定的脂肪酶活性[21]。磷脂酶 A1 廣泛物中。磷脂酶 A2（phospholipaseA2）作用于 Sn-2 位上的脂肪酸使之水溶血磷脂。它廣泛存在于生物體內(nèi)，尤其是富含于蛇的毒液和哺的分泌液中[22]。PLA2 參與多種生理過(guò)程，包括磷脂消化，信號(hào)膜重塑和宿主防御[23]。市場(chǎng)上已有商品名為 Lecitase10L 的 PLA磷脂酶 B（phospholipaseB）水解 SN-1 及 SN-2 的酰基，釋放出；也稱(chēng)作溶血磷脂酶。磷脂酶 C（phospholipaseC）切的位置在磷酸鹽基團(tuán)前，并釋

合肥工業(yè)大學(xué)專(zhuān)業(yè)碩士研究生學(xué)位論文His280、Ser141 三個(gè)氨基酸殘基組成，這個(gè)三聯(lián)體通過(guò)氫鍵相連，當(dāng)?shù)孜镂降交钚灾行臅r(shí) Ser 上面的羥基氧孤對(duì)電子對(duì)電子進(jìn)攻羰基碳正離子形成四元環(huán)的中間體，這時(shí) Ser 和 His 之間的氫鍵斷裂，釋放產(chǎn)物和 Ser 酰基脂肪酸[110,111]。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2715053