親水性人參皂苷的提取分離及分析方法研究

發(fā)布時間：2020-06-06 06:13

【摘要】：人參(Panax ginseng C.A.Mey.)是五加科(Araliaceae)人參屬(Panax)植物,俗稱“百草之王”,能安神止悸,明目益智。人參皂苷是人參的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、保護心腦血管等藥理作用。截止目前,國內外學者已經從人參屬植物中發(fā)現了一百多種人參皂苷類化合物,其中大部分屬于疏水性化合物,僅有小部分是親水性化合物。由于親水性人參皂苷分離難度較大,因此盡管親水性人參皂苷在人參屬植物中含量較高,但至今為止相關的研究報道也遠遠少于疏水性人參皂苷。為了明確親水性人參皂苷在人參屬植物中的分布,探討親水性人參皂苷與人參藥理作用的關聯性,開發(fā)這些親水性人參皂苷的醫(yī)藥用途,本文對親水性人參皂苷類化學成分進行了提取、分離、結構鑒定與分析方法的研究。本文首先對人參中親水性人參皂苷進行了提取、分離。從70%甲醇提取物中共分得8個單體化合物,利用NMR、MS、IR等波譜學手段鑒定了其中7個單體的化學結構。其中2個為新化合物,1個為首分化合物,4個為已知化合物。新化合物分別為3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-達瑪-23-烯-3β,12β,20S,25-四醇和3-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖基}-20-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-達瑪-24-烯-3β,12β,20S-三醇;首次從人參中分離得到的化合物為竹節(jié)參皂苷VI;已知化合物分別為人參皂苷Ro、Ra_1、Ra_2和Ra_3。接著本文建立了人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1和Rc的高效液相色譜含量測定方法并進行了方法學考察。首先,參考藥典條件,考察了以乙腈為流動相時,C-18色譜柱對上述人參皂苷的分離效果。結果發(fā)現,無論怎樣調節(jié)流動相的比例,C-18色譜柱都不能將人參皂苷Ra_1和Rc分開,也不能將人參皂苷Ra_3和Rb_1分開,而酰胺色譜柱則可以將這四個成分完全分離開來。因此,本文建立了利用酰胺色譜柱同時測定人參中人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc含量的新的HPLC測定方法。實驗結果表明,人參皂苷Ra_1在0.4~19.7μg、人參皂苷Ra_2在0.2~9.9μg、人參皂苷Ra_3在0.4~19.6μg、人參皂苷Rb_1在0.4~69.4μg、人參皂苷Rc在0.4~69.6μg之間峰面積y(S_均)和進樣量x(m)的線性關系良好。方法的精密度、重復性、穩(wěn)定性、加樣回收率的RSD值均小于2%,說明方法精密度好,準確度高。利用此方法測定了三種人參屬植物人參、三七、西洋參中人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc的含量。結果表明,人參中人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc的含量分別為0.107%、0.068%、0.048%、0.428%和0.422%;三七中人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc的含量分別為0.008%、0.004%、0.027%、0.875%和0.010%;西洋參中人參皂苷Rb_1、Rc的含量分別為0.630%和0.066%,未檢測到人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3。上述研究結果表明,采用藥典方法測定人參中人參皂苷Rb_1、Rc的含量,其結果有可能偏高。因此本文利用酰胺色譜柱和C-18色譜柱兩種不同的色譜柱測定了人參中人參皂苷Rb_1、Rc的含量,并對測定結果進行了對比分析。結果表明,C-18色譜柱測得的人參中人參皂苷Rb_1、Rc的含量均高于酰胺色譜柱測得的人參皂苷Rb_1、Rc的含量,證明使用藥典方法測定人參中人參皂苷Rb_1、Rc的含量時,因為人參皂苷Rb_1和Ra_3色譜峰重疊,Rc和Ra_1色譜峰重疊,導致測定結果偏高。另外上述研究結果也表明,與C-18色譜柱相比,酰胺色譜柱可能更適合于親水性人參皂苷的分離與含量測定。綜上所述,本論文從人參中分離鑒定了4個已知化合物,2個新化合物,1個首分化合物,共7個親水性人參皂苷單體,豐富了人參皂苷的種類和數量;建立了利用酰胺色譜柱同時測定人參中人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc含量的新的HPLC測定方法;發(fā)現了《中國藥典》規(guī)定的人參、紅參中人參皂苷Rb_1的含量測定方法可能會造成測定結果偏高。本文的研究結果為完善《中國藥典》中人參屬植物及其制劑中人參皂苷Rb_1的含量測定方法提供了新的科學依據,也為同時測定人參屬植物中人參皂苷Ra_1、Ra_2、Ra_3、Rb_1、Rc五種親水性成分提供了新的HPLC含量測定方法。
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