【摘要】：人參(Panax ginseng C.A.Meyer)是我國的名貴傳統(tǒng)中藥,其主要活性成分人參皂苷單體在藥材及提取物中含量不同,其藥理活性也有差異,人參中含量極少的稀有皂苷在抗腫瘤、降血糖、抗衰老等方面效果顯著,如何獲得大量稀有人參皂苷也一直是中外研究人員的研究熱點(diǎn)。本次研究課題主要通過微生物轉(zhuǎn)化法,以長白山野生蟲草屬真菌無性型菌株對人參粗提總皂苷進(jìn)行液體發(fā)酵,并對轉(zhuǎn)化過程中β-D-葡萄糖苷酶的活性進(jìn)行檢測、優(yōu)化轉(zhuǎn)化條件、驗(yàn)證轉(zhuǎn)化路徑,對后期產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供思路,提高人參產(chǎn)業(yè)附加值。1.利用微波輔助纖維素復(fù)合酶的方法,獲得原人參二醇型、三醇型皂苷混合物。其中包括人參皂苷Re、Rb_1、Rg_1、Rd等底物。2.從野生蟲草真菌標(biāo)本獲得性狀穩(wěn)定的蟲草菌株,經(jīng)過β-D-葡萄糖苷酶產(chǎn)酶實(shí)驗(yàn),篩選出5株酶活力較好的菌株,其中菌株ZZ0501.sp產(chǎn)酶能力最強(qiáng)。3.對菌株產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化,通過單因素及響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵條件,得出最佳產(chǎn)酶條件為:初始pH7.0,培養(yǎng)溫度22℃、碳源添加量1%、氮源添加量0.3%、裝液量45%、120r/min培養(yǎng)120h,酶活為36.76U/mL。在此條件下酶活力從基礎(chǔ)產(chǎn)酶培養(yǎng)基的5.56U/mL增至36.76U/mL,比基礎(chǔ)培養(yǎng)基的酶活提高了661%,實(shí)現(xiàn)了提高β-D-葡萄糖苷酶酶活的目的。4.利用高效液相色譜法對轉(zhuǎn)化結(jié)果進(jìn)行定量檢測,最終建立色譜條件:色譜柱Pgrandsil STC C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流動(dòng)相乙腈(A):水(B),梯度洗脫;柱溫30℃;檢測波長203nm;流速1.0mL/min;進(jìn)樣量5μL。經(jīng)測定,5種菌株對人參皂苷均有轉(zhuǎn)化作用,可將皂苷Rg_1轉(zhuǎn)化為Rh_1;皂苷Rb_1轉(zhuǎn)化為Rd;皂苷Rd轉(zhuǎn)化為Rg_3。5.對5株具有轉(zhuǎn)化能力的菌株進(jìn)行分子生物學(xué)、形態(tài)學(xué)鑒定,鑒定結(jié)果為:菌株ZZ0501.sp為文森蟲草(Cordyceps fumosorosea):菌株SM0501.sp為玫煙色擬青霉(Isaria fumosorosea);菌株QT0501.sp為玫煙色擬青霉(Isaria fumosorosea);菌株YP0501.sp為粉棒束孢(Isaria farinosa);菌株Y30501.sp為蛹蟲草擬青霉(Cordyceps militaris)。
【圖文】：

1.1.1 人參皂苷的結(jié)構(gòu)及分類人參皂苷有糖苷和苷元線組成的糖苷類化合物，根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異可分瑪烷型(圖 1-1)、五環(huán)三萜齊墩果酸型(圖 1-2)、奧克梯隆型（圖 1-3）。圖 1-1 達(dá)瑪烷型人參皂苷原人參二醇型皂苷 20(S)-PPD原人參三醇型皂苷 20(S)-PPTFig.1-1 Dammarane type20(S)-PPD Protopanaxadiol saponins 20(S)-PPT Protopanaxtrol saposaponins

1.1.1 人參皂苷的結(jié)構(gòu)及分類人參皂苷有糖苷和苷元線組成的糖苷類化合物，根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異可分瑪烷型(圖 1-1)、五環(huán)三萜齊墩果酸型(圖 1-2)、奧克梯隆型（圖 1-3）。圖 1-1 達(dá)瑪烷型人參皂苷原人參二醇型皂苷 20(S)-PPD原人參三醇型皂苷 20(S)-PPTFig.1-1 Dammarane type20(S)-PPD Protopanaxadiol saponins 20(S)-PPT Protopanaxtrol saposaponins
【學(xué)位授予單位】：吉林化工學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：O657.72;TQ920.6

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