【摘要】：近年來,“超級細菌”的出現(xiàn)給人類的生命安全帶來了極大的威脅。多重耐藥鮑曼不動桿菌在ICU中的耐藥率高達90%以上,臨床上對其有效的抗生素少之又少。因此噬菌體療法逐漸被人們所關注,然而面對這種“超級細菌”,即使是噬菌體,也會面臨產(chǎn)生抗性菌株的問題,所以單一用藥效果不佳,聯(lián)合用藥成為了一種新的趨勢。噬菌體與抗生素的聯(lián)合,不僅能夠產(chǎn)生更好的抗菌效果,還可以抑制各自抗性菌的產(chǎn)生,產(chǎn)生協(xié)同作用,同時還可以不斷篩選新的噬菌體產(chǎn)生新的組合。本研究旨在以多重耐藥鮑曼不動桿菌為宿主,分離出裂解性噬菌體,然后與抗生素聯(lián)合作用于浮游細菌和生物被膜,篩選出具有明顯協(xié)同作用的抗菌組合,本實驗主要分以下三個部分進行:第一部分:通過雙層平板法分離和純化獲得一株裂解性噬菌體,命名為M1;其噬菌斑直徑約3 mm,中心明亮透徹并且四周存在暈環(huán);通過透射電鏡觀察,頭部呈正六面體結構,直徑約為50 mm,帶有一個不可收縮的短尾,屬于短尾科噬菌體;最佳感染復數(shù)為0.001;潛伏期小于10 min,裂解期約55 min,裂解量約300 PFU/infected cell;噬菌體對溫度和pH穩(wěn)定性較高;不同感染復數(shù)的噬菌體抑菌效果無顯著差異(P0.05)。第二部分:將最佳感染復數(shù)的噬菌體M1與8種抗生素分別聯(lián)合應用作用于浮游細菌,通過監(jiān)測細菌以及噬菌體濃度來反映協(xié)同作用的產(chǎn)生。結果顯示:噬菌體M1與MIC(Minimal Inhibit Concentration)的利福平以及1/2 MIC的美羅培南聯(lián)合,具有明顯的協(xié)同作用,與1/4 MIC的米諾環(huán)素,具有較強的協(xié)同作用;噬菌體與敏感抗生素聯(lián)合應用時,抗生素濃度的選擇以及加入順序對協(xié)同作用產(chǎn)生影響。第三部分:將噬菌體M1與抗生素聯(lián)合應用作用于生物被膜,觀察是否有協(xié)同作用的產(chǎn)生,利用結晶紫染色法和活菌計數(shù)法評價生物被膜的清除情況。結果顯示:噬菌體M1作用4 h時,能夠清除98%的生物被膜,然而隨著時間的延長(12 h),對生物被膜的清除能力逐漸減弱直至消失;噬菌體M1與1/2 MIC的利福平聯(lián)合作用于生物被膜12 h,能夠產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用。結論:分離、獲得一株能夠裂解多重耐藥鮑曼不動桿菌的噬菌體M1,生物學特性穩(wěn)定、潛伏期短、體外裂解能力強;噬菌體M1與利福平、美羅培南以及米諾環(huán)素聯(lián)合應用作用于浮游細菌時,能夠明顯抑制各自抗性菌的產(chǎn)生,產(chǎn)生協(xié)同作用,并且協(xié)同作用的強弱與抗生素濃度的選擇以及聯(lián)合應用的先后順序有關;噬菌體M1作用4 h時,能夠清除98%的生物被膜,并且與利福平聯(lián)合應用作用于生物被膜時,也會產(chǎn)生協(xié)同作用。
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TQ460.1

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