【摘要】：蓮藕是一種具有多種生物功能的水生蔬菜,其中的多糖是其生物活性成分之一,具有減肥、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血脂及降血糖等功能。Se是一種人體不可缺少的微量元素,機(jī)體的一些正常生理功能都離不開Se,但其攝入量不好控制,稍一不慎,容易因攝入過量引起中毒。納米硒的毒性較低,且具有較好的生物活性。利用多糖作為模板制備的納米硒,可以兼具多糖和納米硒的生物活性,是未來食品及醫(yī)藥界的發(fā)展方向。本文以蓮藕渣為原材料,通過水提醇沉法制備蓮藕渣多糖,并對其多糖提取得率、多糖含量、硫酸根含量、糖醛酸含量、蛋白含量進(jìn)行了測定,利用DEAE Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100依次對蓮藕渣多糖進(jìn)行分離純化,并對其分子量、單糖組分進(jìn)行了分析,利用傅里葉紅外光譜(FT-IR)、核磁共振波譜及甲基化和GC-MS對其結(jié)合方式進(jìn)行了探究;然后以蓮藕渣多糖刺激RAW264.7細(xì)胞構(gòu)建一種體外的炎癥模型,探索蓮藕渣多糖對巨噬細(xì)胞MAPKs及PI3K-AKT信號通路的影響,細(xì)胞液中TNF-α、iNOS、IL-6 mRNA的表達(dá)量利用半定量RT-PCR 法檢測,Akt、p-Akt、IκBα、p-IκBα、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38及核內(nèi)c-fox、c-Jun水平利用免疫印記蛋白法檢測:最后以分離純化后的蓮藕渣多糖為模板,利用亞硒酸鈉與抗壞血酸在水溶液中的還原反應(yīng),室溫下反應(yīng)4 h,制備蓮藕渣多糖納米硒。探究了不同蓮藕渣多糖與亞硒酸鈉的摩爾比,并利用紫外全波長掃描法,結(jié)合粒度儀測其粒徑的大小變化,確定了最佳的蓮藕渣多糖與亞硒酸鈉的摩爾比,利用SEM、TEM、XRD、FT-IR及粒度儀對蓮藕渣多糖納米硒進(jìn)行了表征。主要的研究結(jié)果如下所示:(1)利用水提醇沉法制備蓮藕渣多糖的得率為7.76±0.79%,多糖含量為69.19±0.24%,糖醛酸含量為1.48±0.20%,硫酸根含量為5.8±0.31%,蛋白含量為28.33±1.18mg/mL;通過測其電位及FT-IR可知,LRP為酸性多糖;凝膠滲透色譜儀測得蓮藕渣多糖的分子量為1.24 kDa;GC-MS測其單糖組分主要是葡萄糖;FT-IR表明蓮藕渣多糖在4000～1000 cm-1范圍內(nèi)有特征吸收峰;核磁共振數(shù)據(jù)進(jìn)一步支持LRP通過α-糖苷鍵連接。(2)水提法從蓮藕渣中提取蓮藕渣多糖(LRP),以LRP刺激RAW264.7細(xì)胞建立體外炎癥模型,研究蓮藕多糖對巨噬細(xì)胞MAPKs及PI3K-AKT信號通路的影響。細(xì)胞液中 TNF-α iNOS、IL-6mRNA 的表達(dá)量利用半定量 RT-PCR 法檢測;Akt、p-Akt、IκBα、p-IκBα、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38 及核內(nèi) c-fox、c-Jun 水平利用免疫印記蛋白法檢測。結(jié)果表明,LRP沒有毒性,并且可以上調(diào)相關(guān)炎癥基因mRNA的表達(dá)水平,提高p38、IκBα等的磷酸化水平;使用掃描電子顯微鏡觀察對照和LRP處理的RAW 264.7細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,表明LRP可以激活RAW 264.7細(xì)胞,促進(jìn)炎癥反應(yīng)。(3)以蓮藕渣多糖為模板,利用抗壞血酸與亞硒酸鈉的還原反應(yīng)制備LRP-SeNPs,探究了蓮藕渣多糖與亞硒酸鈉溶液的摩爾比對蓮藕渣多糖納米硒粒徑的影響,利用ICP測定了 LRP-SeNPs中硒的含量,雙波長比色法、粒度儀、SEM、TEM、XRD對LRP-SeNPs進(jìn)行表征。實驗結(jié)果表明:蓮藕渣多糖與亞硒酸鈉溶液的摩爾比為30:1(LRP的濃度為6 mg/mL)、室溫下反應(yīng)4 h,可以得到性質(zhì)較穩(wěn)定、粒徑大小約為40 nm左右的蓮藕渣多糖納米硒顆粒。由ICP可知,蓮藕渣多糖納米硒的硒含量為19.18mg/L。由SEM和TEM可知,該LRP-SeNPs較均一、分散,室溫下靜置一個月后的溶液仍然透明澄清,并且無聚沉、無沉淀。
【圖文】：

由上圖ｌ可知，０、Ｏ．ｌ邋ｍｏｌ／Ｌ的氯化鈉洗脫峰較高，而０．３邋ｍｏｌ／Ｌ的氯化鈉洗脫峰較矮，，逡逑說明ＬＲＰ－丨和ＬＲＰ－２的含量較多，ＬＲＰ－３的含量較少。利用粒度儀對三個組分進(jìn)行測定，逡逑結(jié)果如圖２所示，蓮藕渣多糖去離子水洗脫峰（ＬＲＰ－ｌ）、Ｏ．ｌ邋ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ組分（ＬＲＰ－２）逡逑和０．３邋１１１0丨幾的他（：１組分（０＾－３）均帶有一定的負(fù)電荷，屬于酸性多糖。逡逑

圖２不同梯度洗脫所得ＬＲＰ的電位（ａ－ＬＲＰ－ｌ；邋ｂ－ＬＲＰ－２；邋ｃ－ＬＲＰ－３）逡逑Ｆｉｇ．２邋Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ邋ｏｆ邋ＬＲＰ邋ｏｂｔａｉｎｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｅｌｕｔｉｏｎ邋（ａ－ＬＲＰ－１邋；邋ｂ－ＬＲＰ－２；邋ｃ－ＬＲＰ－３）逡逑如圖３所示，ＬＲＰ－１、ＬＲＰ－２、ＬＲＰ－３經(jīng)ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００進(jìn)一步分離純化得到三個組逡逑分：ＣＬＲＰ－１、ＣＬＲＰ－２、ＣＬＲＰ－３。圖中的洗脫峰均有且只有一個對稱峰，表明經(jīng)過分離純逡逑化得到的蓮藕渣多糖是比較純的多糖。逡逑Ｘ＊９Ｃ邋ｎ？ａｊ邐（－■■■＊■■—邐ａｍ）逡逑３逡逑Ｌ邋Ａ邋Ｌ逡逑０邋．邋４邋，、…邐邐邐邐邐邋０．０邋＜逡逑－．ｍｒｎｍｍｆｒａｉ邋．邋ｕｉ邋．．邋．．．邋！邐Ｗ邋．．．．．．ｍｍｉ邋ｒ｜，ｒａｍｍ，邋邋%煎澹睿恚湄擼擼礤澹皰遑咤澹甆邐＊邐＇邐＇邐
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ281;TS218

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本文編號：2654401