【摘要】：松樹萎蔫病(Pine wilt disease,PWD)是由松材線蟲(Bursaphelenchusxylophilus)引起,使松屬植物快速枯死萎焉的一種毀滅性病害,嚴(yán)重威脅我國(guó)林業(yè)的發(fā)展。但是目前市場(chǎng)所應(yīng)用的殺線藥劑效果差、毒性強(qiáng)、殘留高,因此應(yīng)從自然界入手開發(fā)高效低毒的生物源藥劑。內(nèi)寄生真菌的次生代謝產(chǎn)物豐富并有良好的殺蟲活性,可對(duì)其防治松材線蟲的活性進(jìn)行研究。本文通過(guò)四個(gè)部分確定活性菌株發(fā)酵液中毒殺松材線蟲的活性化合物:從7株供試的內(nèi)寄生真菌中篩選出對(duì)松材線蟲毒性最強(qiáng)的高效菌株;活性菌株發(fā)酵濾液穩(wěn)定性的測(cè)定;活性萃取物的提取、分離、鑒定以及馬尾松松枝水培實(shí)驗(yàn)的研究。1.在室內(nèi)條件下,采用浸漬法測(cè)定3株淡紫擬青霉(Paecilomyces lilacinus)和4株厚垣孢普可尼亞菌(Pochonia chlamydospora)的發(fā)酵原液對(duì)松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)的毒殺活性,并通過(guò)生長(zhǎng)速率法研究活性菌株的發(fā)酵濾液在不同條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果表明:淡紫擬青霉PT1菌株的發(fā)酵濾液對(duì)松材線蟲的毒殺作用最強(qiáng),處理72 h后松材線蟲的校正死亡率高達(dá)88.37%。PT1菌株發(fā)酵濾液穩(wěn)定性較好,表現(xiàn)出良好的熱穩(wěn)定性(除121℃C的極端高溫環(huán)境);能夠抵抗強(qiáng)酸強(qiáng)堿及紫外線照射;在氧化還原劑的影響下依然能保持穩(wěn)定;但在金屬離子測(cè)定中,Zn2+、Fe2+與Fe3+對(duì)發(fā)酵液穩(wěn)定性影響較大。證明PT1菌株發(fā)酵液具有良好的穩(wěn)定性能夠保證其次生代謝產(chǎn)物不受破壞,顯現(xiàn)了良好的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。2.通過(guò)不同萃取溶劑、不同萃取比例的篩選,得到殺線活性最強(qiáng)的萃取物。并運(yùn)用薄層層析、硅膠柱層析及GC-MS分析的方法對(duì)活性菌株的高效萃取物進(jìn)行提取、分離、純化、鑒定。明確淡紫擬青霉PT1菌株發(fā)酵濾液中毒殺松材線蟲的活性成分。試驗(yàn)結(jié)果表明:從7種有機(jī)溶劑中篩選出乙酸乙酯(1:3比例)萃取相是PT1菌株活性成分較為合適的萃取溶劑及比例。浸漬法測(cè)定結(jié)果表明PT1菌株乙酸乙酯(1:3比例)萃取物處理松材線蟲24 h和48 h的LC50分別為36.001 μg/mL和26.782 μg/mL。石油醚和正丁醇的混合比例為6:4時(shí),薄層層析展開后有5條帶,展開效果最佳,以石油醚-正丁醇6:4作為洗脫液,將高效萃取物經(jīng)柱層析分離后得到活性組分YZ-4。并用GC-MS分析YZ-4組分,共鑒定出4種化合物,分別為假石榴皮堿、棕櫚酸、鄰苯二甲酸苯基丁基酯和油酸。活性菌株P(guān)T1發(fā)酵產(chǎn)物有望研開出新型微生物源殺蟲劑。3.馬尾松松枝放入到4種化合物溶液、阿維菌素溶液、“CK+蟲”及CK組(蒸餾水)中培養(yǎng),然后向馬尾松松枝接種松材線蟲液。定期觀察松枝的病情指數(shù)、蒸騰強(qiáng)度及流脂量。試驗(yàn)結(jié)果表明,化合物假石榴皮堿和鄰苯二甲酸丁基己酯能夠有效的控制松材線蟲病情的發(fā)展,在處理12 d后,病情指數(shù)始終為0.00,與化學(xué)藥劑阿維菌素處理組病情指數(shù)相同,略低于CK處理組的病情指數(shù)(0.26);處理后9 d后,馬尾松松枝的蒸騰強(qiáng)度和流脂量沒有顯著改變。而“CK+松材線蟲”處理組的蒸騰強(qiáng)度和流脂量顯著減少甚至停止。此結(jié)果說(shuō)明,化合物假石榴皮堿和鄰苯二甲酸丁基己酯能夠有效的抵御松材線蟲病的發(fā)生發(fā)展并且能夠維持馬尾松松枝正常的生理狀態(tài),為松屬植物建立了較好的保護(hù)屏障。
【圖文】：

圖２－３邋ｐＨ對(duì)ＰＴ１菌株發(fā)酵液殺線活性的影響逡逑２．３．４金屬離子對(duì)淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液穩(wěn)定性的影響逡逑試驗(yàn)結(jié)果顯示（見圖２－４）：邋Ｚｎ２＋、Ｆｅ２＋與Ｆｅ３＋對(duì)ＰＴ１菌株發(fā)酵液的殺線活性影響較逡逑大，發(fā)酵液對(duì)松材線蟲的校正死亡率分別下降了約１０％、７％、１２％；而Ｎａ＋和Ｍｇ２＋對(duì)逡逑ＰＴ１菌株發(fā)酵液殺線活性的影響較小，較原始發(fā)酵液殺線活性下降３％左右；Ｃｕ２＋的添逡逑加幾乎對(duì)發(fā)酵液的殺線活性無(wú)影響；Ｋ＋使發(fā)酵液殺線活性增加了邋２．１％。結(jié)果表明淡紫逡逑擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液對(duì)Ｎａ＋、Ｍｇ２＋、Ｃｕ２＋和Ｋ＋均具有較好的穩(wěn)定性。逡逑１００邋－１逡逑ｆ邋ｓ0－邐ｂ邐ｃ邐１邐ｂ逡逑｜邐，邐ｄ邐ａ邐１邐ａ邐Ｉ邐Ｉ逡逑１邋ｇ邐Ｉ邐ｊ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ逡逑ＩＩＭＩＭＩ逡逑ｂｕ邋－１￣邋￣ｉ￣邋￣ｉ￣邋￣ｉ￣￣邋￣￣ｉ￣￣邋邋邋ｉ￣邋￣ｉ￣邋￣：逡逑Ｚｎ２＋邋Ｆｅ２＋邋Ｆｅ３＋邋Ｃｕ２＋邋Ｎａ＋邋Ｍｇ２＋邋Ｋ＋邋對(duì)照逡逑圖２－４金屬離子對(duì)ＰＴ１菌株發(fā)酵液殺線活性的影響逡逑２．３．５紫外線對(duì)淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液穩(wěn)定性的影響逡逑將淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液經(jīng)紫外線照射２、４、８、１２、２４邋ｈ后發(fā)現(xiàn)，隨著處理逡逑時(shí)間的增加，殺線活性與對(duì)照相比稍有下降，但變化很小。紫外線照射２４邋ｈ后，與對(duì)逡逑照組相比松材線蟲校正死亡率下降不到４％

３邐５邋Ｗ邋１１邐１３邋灥逡逑圖２－３邋ｐＨ對(duì)ＰＴ１菌株發(fā)酵液殺線活性的影響逡逑２．３．４金屬離子對(duì)淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液穩(wěn)定性的影響逡逑試驗(yàn)結(jié)果顯示（見圖２－４）：邋Ｚｎ２＋、Ｆｅ２＋與Ｆｅ３＋對(duì)ＰＴ１菌株發(fā)酵液的殺線活性影響較逡逑大，發(fā)酵液對(duì)松材線蟲的校正死亡率分別下降了約１０％、７％、１２％；而Ｎａ＋和Ｍｇ２＋對(duì)逡逑ＰＴ１菌株發(fā)酵液殺線活性的影響較小，較原始發(fā)酵液殺線活性下降３％左右；Ｃｕ２＋的添逡逑加幾乎對(duì)發(fā)酵液的殺線活性無(wú)影響；Ｋ＋使發(fā)酵液殺線活性增加了邋２．１％。結(jié)果表明淡紫逡逑擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液對(duì)Ｎａ＋、Ｍｇ２＋、Ｃｕ２＋和Ｋ＋均具有較好的穩(wěn)定性。逡逑１００邋－１逡逑ｆ邋ｓ0－邐ｂ邐ｃ邐１邐ｂ逡逑｜邐，邐ｄ邐ａ邐１邐ａ邐Ｉ邐Ｉ逡逑１邋ｇ邐Ｉ邐ｊ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ逡逑ＩＩＭＩＭＩ逡逑ｂｕ邋－１￣邋￣ｉ￣邋￣ｉ￣邋￣ｉ￣￣邋￣￣ｉ￣￣邋邋邋ｉ￣邋￣ｉ￣邋￣：逡逑Ｚｎ２＋邋Ｆｅ２＋邋Ｆｅ３＋邋Ｃｕ２＋邋Ｎａ＋邋Ｍｇ２＋邋Ｋ＋邋對(duì)照逡逑圖２－４金屬離子對(duì)ＰＴ１菌株發(fā)酵液殺線活性的影響逡逑２．３．５紫外線對(duì)淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液穩(wěn)定性的影響逡逑將淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液經(jīng)紫外線照射２、４、８、１２、２４邋ｈ后發(fā)現(xiàn)，隨著處理逡逑時(shí)間的增加，，殺線活性與對(duì)照相比稍有下降，但變化很小。紫外線照射２４邋ｈ后，與對(duì)逡逑照組相比松材線蟲校正死亡率下降不到４％，表明淡紫擬青霉ＰＴ１菌株發(fā)酵液產(chǎn)生的活逡逑性物質(zhì)對(duì)紫外光有較好的穩(wěn)定性（見圖２－５）。逡逑－１２－逡逑
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TQ920.1

【參考文獻(xiàn)】

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2 石妍;厚垣孢普可尼亞菌PC152菌株生物學(xué)及制劑工藝研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2011年

3 張乾順;黃綠木霉菌抑菌活性成份的純化及其對(duì)人工細(xì)胞膜的影響[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2633405